Моделі гіпоксія індукованої neoangiogenesis сітківки показують збільшення числа точок розгалуження, ангіогенних паростки, площа судинних і зниження intercapillary відстань в zebrafish20. Ці висновки підтримують ідею, що даніо реріо подвержен21мікрососудістих ускладнень діабету, як ключові висновки пізніше діабетичної ретинопатії включають гіпоксія опосередкованої neoangiogenesis, який тісно пов'язаний з VEGF вираз. Гіперглікемія індуковані зміни в сітківці даніо реріо призводять до збільшення товщини судів, але зберегти загальний кучность22. Чергуючи занурення в рішеннях глюкози для 30 днів також зменшується товщина IPL і INL23. Також вже було показано безпосередній вплив глюкози метаболітів в zebrafish як метаболічні прихильники захворюванням. Додаткові судинної hyperbranching спостерігалося в багажнику судинну zebrafish ембріона після інкубації з Метілгліоксаль24. На даний момент це не тварина модель, яка забезпечує всі основні критерії діабетичної ретинопатії. Ранні зміни часто зустрічаються, але перехід в проліферативної діабетичної ретинопатії отсутствует25. Даніо реріо також підпадає під це визначення, як ми тільки бачили гіпоксія опосередкованої neoangiogenesis або гіперглікемія індукованих змін до сих пір. Поточні результати підтримують ідею, що даніо реріо сприйнятливий до гіперглікемії опосередкованої судинних змін і як тваринної моделі потенційно може показати прогресії в проліферативної діабетичної ретинопатії. Залежно від сили і впливу гіперглікемії опосередкований ефект право Експериментальна модель може призвести до ішемії в деяких областях даніо реріо сітківки і заохочувати neoangiogenesis в якості ключових критеріїв проліферативної діабетичної ретинопатії. Однак як даніо реріо - порівняно новий гравець в області моделювання довгострокових мікросудинної патологій, майбутніх діабет моделі в zebrafish буде надати додаткову інформацію і уточнити його значення щодо інших моделей і їх патологій. Наприклад в хрест tg (gata1a: DsRed) рибки даніо реріо з червоною маркуванням еритроцитів в tg (fli: EGFP) лінії можуть використовуватися одночасно візуалізувати потенційних внутрішньоочних кровотечах в майбутньому даніо реріо моделі показані мікроаневрізми як провісник прогресії в НДР.
Так як сітківки судинну прогресує в правонаступництва аркади, оцінки intervascular відстань, кількість точок розгалуження і площа судинних пов'язані з відстань від центральної оптичної артерії. Щоб уникнути упередженості в параметрах нарахованих судин, потрібна точка орієнтації. МОК є така структура і є досить актуальним, оскільки області судинної діяльності лежать в прямий просторової близькості. Для постійної оцінки сітківки сканування слід розділити на кілька розділів прямокутне зображення з послідовної відстань до МОК. Вся Сітківка повинні бути проаналізовані і чисельно симетрично поширені зображення. Даніо реріо сітківки показує областей з високим і низьким капілярів і нерівний розподіл ділянок зображення може привести до додаткових упередженості.
Малюнок 12: приклад презентації судинної параметрів як індикація візуалізації сітківки судинну. Вимірювання intervascular відстані (червоний подвійний стрілки) поблизу внутрішній оптичний коло (МОК) (A). Три точки розгалуження (червоні кола) поблизу МОК (B). Візуалізація сітківки судинну даніо реріо зі збільшеною області (червоний прямокутник) показані проростання судна (C). Діаметр судини, виміряним на певній відстані (білий подвійний стрілки) від центральної артерії (білий хрест) (D). Судно щільність - це відсоток сітківки площа, яку займає накладення судів (діагональ червоні лінії) (E). Будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.
Для вимірювання intervascular відстані, необхідно задати певну відстань в МОК в якості стандарту (Малюнок 12А, білий подвійний стрілки) і намалюйте Уявна горизонтальна лінія (Малюнок 12А, горизонтальної білої лінії) паралельно з МОК. Відстань між судів на цьому рядку підсумовуються і арифметично в середньому дорівнює intervascular відстань. Розгалуження очок враховуються всередині кожного зображення, всякий раз, коли судно розбиває і більш ніж однієї судинної люмен продовжити з точки зору походження. Це також включає в себе горизонтальних зв'язків між капілярів. Важливо залишатися відповідно до аналізу і вирішити, які розгалуження точки розраховувати і тримати ці правила впродовж всього експерименту для зменшення непотрібних варіації. Судинні проростання, як показано на малюнку 12 c, це ще один параметр, який може враховуватися в кожному зображенні оцінити вплив на судинну сітківки. Паростки ангіогенних не дотримуються аркада як спадкоємність між центральною артерії і МОК і фокус поблизу зовнішньої частини сітківки. Для оцінки певних судно діаметрів, точки орієнтації завжди потрібно від якого задану відстань знаменує вимірювання пляма. Походження центральної артерії сітківки всередині надає такі керівні вказівки для судів головного стебла (12D рис, білий хрест). Площа, яку займає судів (Малюнок 12E, Діагональ червоні лінії) у відсотках від області всієї сітківки судинного щільність і побічно співвідносяться аваскулярний області.
Повний конфокальний сканування одного зразка повинен складатися з кілька деталізованих зображень дозволяє візуалізацію дрібних капілярів hypersprouting. Щоб оптимізувати час і ресурси, що витрачаються на цей крок, автоматизованих культиватора процедура повинна використовуватися з глибиною загального сканування для кожної плитки. Нерівномірним монтажу сітківки може значно збільшити час, витрачений для сканування судинну з конфокального мікроскопа. Хотілося б тільки сканування судин шар (рис. 13B, білий квадрат), але часткове включення GCL оптимальний підхід часто необходім.Оставів надлишок Довжина зорового нерва після усічення, а також скорочення для досягнення плоским гора, будучи надто коротким, може привести до нерівномірним монтажу.
Малюнок 13: порівняння він фарбування і аутофлюоресценція в сітківці дорослих рибок даніо. Сітківки судинну в фокусі вище GCL (A). Сітківки судинну (біла коробка) показані зелений сигнал EGFP і шарах сітківки, експонується сильні аутофлюоресценція ((B)). Будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.
Як належної підготовки судинну даніо реріо сітківки вимагає попередньої підготовки, невеликий розмір вибірки з непідготовлених діссектора і сильно змінюючи результати підготовки є основним обмеженням методики. У той час як підготовка очі даніо реріо tg (fli: EGFP) дає швидкий проникливість в стан судинну, техніка і раніше використовує близько 20 хвилин робочого часу за сітківки для досвідчений дослідник. Всі ці кроки підготовки для сітківки судинну повинна виконуватися під мікроскопом розсічення і необхідність діссектора залишитися зосереджені весь час як недбало крок потенційно може викликати обрив судна. Діссектор повинні практикувати регулярно, як тривала відсутність від підготовки зменшує ймовірність диссектор збереження цілісності судна.
Крім того додаткова індикація через імуногістохімія (IHC) як і раніше обмежена, оскільки лише невелика кількість антитіл, що перевірявся на тканини людини і гризунів працюють з даніо реріо. Експериментатори зацікавлені в ІХС рекомендується для пошуку даніо реріо специфічні антитіла, особливо при роботі з нової мети. Крім того рекомендується використовувати додаткові даніо реріо репортер лінії, які є корисними для вивчення клітин за судинну в очі. Ця стратегія, однак, забирає багато часу, як він займає кілька місяців для створення лінії дорослих рибок даніо, які несуть кілька трансгенних репортери.
Проте даніо реріо створює неповторний колорит переваг. Вони є відносно невеликими і легко відтворити. Вони можуть швидко зростати до дорослих етапів і їх ембріони є оптимальними для скринінгу наркотиків. Поле легко росте і більше літератури стає доступним. З здатність генерувати гена нокаути на швидкій швидкості і велика кількість трансгени флуоресценції репортер лінії вибір для даніо реріо стримується тільки обраних досліджень питання.
