Протокол, описаний тут, оптимізований для швидкої розсічення стегнової кістки миші і великогомілкової кістки з мінімальним пошкодженням кісткової тканини. Цей метод підходить для цілого ряду наступних аналізів, включаючи дослідження біомеханіки, гістоморфометріі (рис 1А - В) і гістології (рис 1C) 4,7. Представник histomophometric micoCT 3D реконструкція (Малюнок 1А - B) показує, що як губчастої кістки і кортикального оболонки зберігаються, що дозволяє точно оцінити стандартизованих структурних параметрів для гістоморфометріі кістки, в тому числі губчастої кількості, товщини і відстані; обсяг кісткової тканини; і кортикальну товщину, серед інших заходів 8. Представник гістологічні секції показує H & E фарбували фіксовані формаліном і декальцінірованний гомілкової (рис 1C). Зображення демонструє цілісність обох кальцифікованими Ьодін і клітинний кістковий мозок для гістологічного аналізу.
Процедура кісткового мозку ізоляція зберігає стерильність простору кісткового мозку, має низьку обробку для зниження забруднення, і не вимагає нарізку довгої кістки, тим самим зменшуючи втрати врожаю кісткового мозку. Цей кістковий мозок підходить для багатьох наступних застосувань, в тому числі проточної цитометрії 5 і ПЛР - аналіз. Крім того, ця процедура може бути використана для виділення кісткового мозку для первинної культури клітин клітин кісткового мозку, в тому числі остеокластів і остеобластів (фіг.2 - B) -4,6.
Малюнок 1. Гистоморфологические і гістологічні аналізи мишей довгих трубчастих кісток. Тривимірна microCT реконструкція великогомілкової кістки миші, показуючи (A) зовнішній кортикальний оболонку і (B Чонг>) губчаста кістка (масштаб бар = 0,5 мм). (C) Гістологічне H & E пляма в декальцінірованний і секційного великогомілкової кістки (4x). Зображення люб'язно надані Кетрін Weilbaecher, Вашингтон школи медицини університету, США. Будь ласка , Натисніть тут , щоб подивитися збільшену версію цієї фігури.
Малюнок 2. Первинна кісткового мозку Культура клітин для диференціації остеокластів і остеобластів. (A) TRAP фарбування на багатоядерні остеокластів через 7 днів в osteoclastogenic середовищах (4x). (В) лужноїфосфатази (фіолетовий колір) для остеобластів і алізарин червоний (червоний колір) пляма для мінералізації після 21 днів у остеогенной ЗМІ. Зображення люб'язно надані Кетрін Weilbaecher, Вашингтон школи медицини університету, США.Iles / ftp_upload / 53936 / 53936fig2large.jpg "цільових =" _blank "> Будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися збільшену версію цієї фігури.
