- Непрямі методи виявлення герпесвірусної інфекції
- Визначення антитіл проти ВПГ
- Методи прямого виявлення вірусу
На читання 7 хв.
Вірус герпесу (ВПГ, herpes simplex) - це один з найбільш поширених вірусів сучасності. Про його присутності в організмі людини свідчать антитіла до вірусу герпесу IgM і IgG. Хоча цей вірус не може позбавляти людину життєдіяльності, він іноді викликає досить неприємні захворювання.
IgG1 моноклональних антитіл (імуноглобулінів)
Якщо має місце хронічний вірус простого герпесу IgG показують підвищені значення. Позитивно зазначену ухвалу IgM виникає безпосередньо після інфікування.
Непрямі методи виявлення герпесвірусної інфекції
IgG до вірусу простого герпесу проти структурних вірусних білків (білки, що містяться в вірусних частинках) створюються, в основному, в ранній фазі первинної інфекції та мають анамнестический характер (зберігаються протягом усього життя). Виняток становлять антитіла до вірусу простого герпесу у дітей раннього віку, які можуть бути характерні більш повільним створенням (наприклад, при інфекції ВПГ-6). Таким чином, в разі маленьких дітей присутній необхідність обстеження зразка сироватки, взятої з інтервалом в 14 днів.
Найчастіше виявлення антитіл IgG проводиться за допомогою методу ІФА, Обидва обстеження повинні нести ту ж лабораторію. Алергія антитіла є особливо важливими для епідеміологічних цілей і для оцінки сприйнятливості людини до первинної інфекції.
Для діагностики herpes simplex 1 і 2 типу важливим є визначення IgG антитіл до герпесу, особливо, тих вірусів, які розширені повсюдно (ВПГ-2, ВПГ-8). IgG позитивний до вірусу простого герпесу 1 типу або 2 вважається доказом активної інфекції. Також важливу роль відіграє значне збільшення IgG антитіл (значущим вважається, по крайней мере, чотирикратне збільшення) в парних сироватках.
Імуноферментний аналіз дозволяє виявити імуноглобуліни G до вірусу простого герпесу
IgM і IgA утворюються тимчасово у відповідь на активну реплікацію вірусу. Таким чином, їх присутність вказує на поточну або нещодавно мала місце інфекцію, яку викликав вірус герпесу. Подібний характер проявляють IgG антитіла проти антигенів ВЕБ. Серологічне дослідження включає в себе виявлення антитіл проти кількох вірусних антигенних комплексів, які сприяють диференціації фази затримки і активної інфекції, або первинної інфекції або реактивації. Герпевіруси іншого типу такі складні діагностичні схеми поки не передбачає.
Антитіла класу g до вірусу простого герпесу, розрізнення первинної і ре інфекції, яку викликав герпесвірус, проводиться з використанням такого фактора, як авідності (здатність до зв'язування) IgG антитіл: під час первинної форми інфекції авідності антитіл є низькою, протягом 2-3 місяців відновлення вони поступово заміщаються антитілами, для яких характерна висока авідність.
Авідність (англ. Avidity) - це сила, з якою полівалентне антитіло взаємодіє з полівалентним антигеном.
Це - емпіричне поняття, яке відрізняється від аффінітівності, що виражає силу взаємодії одного пов'язують ділянки з одним антигеном.
Простіше кажучи, авідності - це валентність антитіл.
Це особливо важливо для діагностики інфекції у вагітних жінок, у яких первинна інфекція певними герпесвирусами (перший або другий тип, ЦМВ) може бути пов'язана з ризиком передачі від матері до плоду. Корисним серологічним дослідженням для діагностики ЕБ-вірусного інфекційного мононуклеозу є визначення гетерофільних антитіл. Це - неспецифічні полівалентні антитіла, які є результатом масивної активації В-лімфоцитів, що супроводжує це захворювання. Дослідження гетерофільних антитіл (тест Пола-Буннеля, тест Еріксона) є значно дешевшим, однак його специфічність і чутливість нижче, ніж при визначенні вірус-специфічних антитіл. Гетерофільні антитіла, як правило, не проводяться у дітей в віці до 6 років.
Визначення антитіл проти ВПГ
Для визначення антитіл проти вірусів герпесу сьогодні використовуються комерційні тести, засновані на принципі ензімоіммуноаналіза (ELISA), непрямої імунофлюоресценції, иммуноблоттинга або зв'язування комплементу. Ці аналізи відрізняються в композиції використовуваного антигену: в той час, як реакція імунофлюоресценції використовують складний багатокомпонентний нативний вірусний антиген, імуноферментні аналізи можуть бути засновані, як на нативном антигене, так і на високоочищених рекомбінантних білках або синтетичних антигенних епітопів, а імуноблотинг використовує тільки очищені рекомбінантні або синтетичні антигени. Таким чином, результати різних методів можуть варіюватися навіть при визначення одного і того ж типу антитіл.
Авідність - індекс, який відображає ступінь міцності зв'язку антитіл IgM та IgG з антигеном і дозволяє визначити терміни інфікування або реактивації вірусу
Для визначення гетерофільних антитіл також доступний імунохроматографічним експрес-тест. Ці тести завдяки швидкості і простоті конструкції, призначені та затверджені для використання безпосередньо в лабораторії, але, в основному, це - попередні тести з більш низькою чутливістю і специфічністю в порівнянні з іншими методами лабораторного серологічного дослідження.
Відкриття вірус-специфічних антитіл має хорошу прогностичну цінність, особливо, в діагностиці первинної інфекції. З огляду на носійства інфекції протягом усього життя, в організмі-хазяїні багаторазово стимулюються вірусні антигени. Результатом цього є тривалий час високі рівні антитіл, які при реактивації інфекції показують лише невеликі, лабораторно часто важко визначаються, зміни. Таким чином, діагностична значимість серологічних методів при реактивації інфекції низька. У дорослих пацієнтів інтерпретація серологічних результатів часто складна і неоднозначна: дорослий організм вже заражений декількома видами вірусів герпесу, які можуть в різних клінічних ситуаціях реактивировать і викликати створення, як специфічних, так і крос-реактивних антитіл.
Методи прямого виявлення вірусу
У пацієнтів з імунодефіцитом, які найбільшою мірою схильні до ризику клінічно значущих герпетичних інфекцій, серологічний діагноз ненадежён, і значно більш ефективним (у багатьох випадках - за необхідне) є пряме виявлення вірусу в клінічних зразках.
Класичні вірусологічні методи пряме виявлення вірусу в клінічних зразках, засновані на виділенні і подальшої ідентифікації вірусу в культурі тканини, можуть бути використані тільки для певних типів вірусів герпесу: в культурах ембріональних фібробластів людини добре розмножуються ВПГ-1 і ВПГ-2. Присутність вірусу в культурі можна виявити протягом 2-3 днів на основі розвитку характерного цитопатичної ефекту (ЦПЕ).
ЦМВ також може бути виділений в культурі тканини, реплікація вірусу, однак, є занадто повільної і, отже, ці методи не підходять для диференціальної діагностики. Вони використовуються для особливих цілей, коли необхідно отримати штам вірусу (наприклад, для генетичного аналізу). Відповідним матеріалом для виділення вірусу є зіскрібки поразок, мазки з верхніх і нижніх дихальних шляхів, з кон'юнктивального мішечка, сечі або ізольовані лейкоцити людини.
Для дослідження периферичної крові або спинномозкової рідини ці методи не підходять. Зразки, призначені для виділення вірусу, необхідно зібрати в спеціальні транспортувальні носії, транспортувати в лабораторію в льоду протягом 24 годин. Через складність, низьку чутливість і тривалості ізоляційні методи в даний час широко замінюються молекулярно-біологічними методами.
При використанні моноклональних антитіл заражені клітини вдається виявити протягом декількох годин або діб після зараження, тобто до того, як вірус пройде кілька циклів репродукції
Іншою альтернативою є пряме иммуногистохимическое виявлення вірусного антигену в клінічному матеріалі з використанням моноклональних антитіл. Спеціалізоване застосування цього методу представлено визначенням антигенемії при цитомегаловірусної інфекції: у гострій фазі, коли доходить до поширення інфекції кров'яним шляхом, в поліморфних кров'яних клітинах периферичної крові накопичується цитомегаловірусний антиген (РР65), який можна виявити непрямий імунофлуоресценції. Цей тест завдяки його високій позитивній прогностичної цінності підходить для моніторингу інфекції і у людей з імунодефіцитом з високим ступенем ризику.
Що стосується иммуногистохимических тестів, їх недоліком є високий ризик помилкових результатів, пов'язаних з неспецифічним зв'язуванням антитіл з певними типами клітин. Для того, щоб розрізняти специфічні і неспецифічні флуоресценції, необхідний значний досвід. Виявлення вірусного антигену в рідинах організму з використанням методу ELISA для діагностичних цілей, як правило, мало чутливий.
