Революція в лабораторній діагностиці вірусного гепатиту С

Набір ПОЛІГЕП-С БІОТІТР

Набір ПОЛІГЕП-С БІОТІТР - набір для якісного і кількісного виявлення РНК вірусу гепатиту С (ВГС, HCV) в сироватці / плазмі крові методом полімеразної ланцюгової реакції.

НАБІР СКЛАДАЄТЬСЯ З ДВОХ КОМПЛЕКТІВ:

• "РНК-ЕКСПРЕС" - комплект для виділення РНК вірусу гепатиту С із сироватки або плазми крові;
• "Набір для проведення ЗТ-ПЛР" - комплект для проведення аналізу методом зворотної транскрипції і полімеразної ланцюгової реакції (ЗТ-ПЛР).

"РНК-ЕКСПРЕС" "Набір для проведення ЗТ-ПЛР"

ОСНОВНІ ПЕРЕВАГИ НАБОРУ РЕАГЕНТІВ ПОЛІГЕП-С БІОТІТР:

• Одностадійна процедура виділення РНК не вимагає виконання складних маніпуляцій;
• Скорочення тривалості пробоподготовки дозволяє обробити більшу кількість біопроб за робочу зміну;
• Відсутність високотоксичних реагентів (фенолу, хлороформу, меркаптоетанол, ізопропілового спирту) забезпечує повну безпеку процедури пробопідготовки для персоналу;
• Істотне зниження витрати лабораторного пластику;
• Перед постановкою ОТ-ПЦР виділена РНК не потребує обробки ДНК-азами, так як в процесі виділення РНК не виділяється вірусна і людська ДНК;
• РНК повністю готова для подальшої постановки ОТ-ПЦР;
• Низька собівартість процедури пробопідготовки дозволяє знижувати собівартість діагностичного тесту;
• Одночасне проведення реакції зворотної транскрипції і полімеразної ланцюгової реакції дозволяє істотно скоротити загальний час дослідження
• Загальний час аналізу, включаючи процедуру пробопідготовки, не перевищує 2 год 20 хв;
• Надійність кількісного визначення вірусного навантаження по 4-м стандартним калібрувальних проб;
• Специфічність праймерів до найбільш консервативним ділянкам генома ВГС дозволяє одночасно виявляти РНК ВГС різних генотипів;
• Виділення РНК без ДНК в ході пробопідготовки і висока надійність специфічності дослідження дозволяє виявляти тільки вірус гепатиту С і повністю виключає перехресні реакції з іншими мікроорганізмами;
• Флуоресцентна детекція результатів реакції ЗТ-ПЛР в ході визначення РНК ВГС забезпечує максимальний захист від контамінації клінічес проб і лабораторного приміщення продуктами реакції ампліфікації і, отже, від хибнопозитивних результатів.

ОСНОВНІ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРУ РЕАГЕНТІВ ПОЛІГЕП-С БІОТІТР:

• Метод виділення РНК ВГС - перейти до опису комплекту "РНК ЕКСПРЕС";
• Метод визначення РНК ВГС. РНК ВГС в сироватці / плазмі крові визначається методом зворотної транскрипції і полімеразної ланцюгової реакцією (ОТ- ПЛР ) З флуоресцентною детекцією в режимі реального часу (FRT);
• Принцип ОТ-ПЦР. Реакція зворотної транскрипції - полімеразної ланцюгової реакції (OT-ПЛР) є варіантом ПЛР, що дозволяє отримувати численні копії ДНК, комплементарної шуканого фрагмента РНК. Першою стадією OT-ПЛР є реакція зворотної транскрипції: синтез на матриці РНК комплементарної ДНК (кДНК) за допомогою ферменту зворотної транскриптази. Надалі в результаті класичної полімеразної ланцюгової реакції в ході багаторазового ампліфікації відбувається накопичення шуканого фрагмента кДНК;
• Принцип FRT. Принцип дії наборів реагентів заснований на використанні методу ПЛР для визначення специфічних ділянок РНК збудників шляхом накопичення (ампліфікації) специфічних фрагментів;
• Характеристика флуоресцентних зондів. Зонд для специфічного фрагмента містить флуорофор FAM (λ поглинання - 494; λ випускання - 520); зонд для внутрішнього контролю містить флюорофор HEX (λ поглинання - 535; λ випускання - 553). Особлива структура зонда класу Pefect Probe дозволяє досягати максимального дозволу методу флуоресцентної детекції за рахунок максимальної різниці між фоновим і специфічним сигналом;
• Чутливість визначення РНК ВГС. За допомогою набору ПОЛІГЕП-С БІОТІТР можна виявити 103 / мл і більше копій РНК вірусу гепатиту С в сироватці або плІзме крові, що відповідає 370 МО / мл відповідно до Другим міжнародним стандартом ВООЗ (WHO) для тестів, які виявлятимуть РНК ВГС (NIBSC 96 / 798);
• Специфічність. Специфічність визначається олігонуклеотидних затравки (праймерами), підібраними до найбільш консервативним ділянкам генома (5 'нетрансльовані область) серед всіх відомих генотипів ВГС, а також специфічними флуоресцентними олігонуклеотидних зондами, комплементарно гібрідізіруют тільки зі специфічними продуктами ампліфікації - точними копіями шуканого фрагмента консервативного ділянки РНК ВГС;
• Характеристики кількісного визначення РНК ВГС. Залежність концентрації РНК ВГС в зразках сироватки / плазми крові при розведенні їх сироваткою / плазмою крові, яка не містить РНК ВГС, має лінійний характер в діапазоні концентрацій 103 - 106 копій РНК ВГС на мл і становить ± 10%. Надійність кількісного визначення вірусного навантаження забезпечується паралельним визначенням титру вірусу в 4-х стандартних калібрувальних пробах.
• Калібрувальні проби являють собою захищену неінфекційну РНК в розчині TE-буфера, що несе фрагменти послідовності вірусу гепатиту С і містять відомі кількості РНК (103, 104, 105 і 106 копій РНК ВГС / мл).

КОМПЛЕКТ РЕАГЕНТІВ ДЛЯ ВИДІЛЕННЯ РНК "РНК ЕКСПРЕС"

Комплект являє собою реагент в пробірках для виділення РНК з біопроб з метою подальшого аналізу методом зворотної транскрипції і полімеразної ланцюгової реакції (ЗТ-ПЛР).

Підготовка клінічного матеріалу до постановки реакції зворотної транскрипції і полімеразної ланцюгової реакції (ЗТ-ПЛР) з метою виявлення РНК-вірусів в діагностичних цілях проводиться із застосуванням методу термо-коагуляційного кондиціонування РНК.

ПЕРЕВАГИ "РНК-ЕКСПРЕС" У ПОРІВНЯННІ З ІНШИМИ набір

Готовий розчин, розфасований в пробірки

• денатурує розчин
• Ізопропиловий спирт
• Розчин носія (т-РНК)
• розчин для промивання
• деионизированная вода
• хлороформ

Термо-коагуляційного кондиціонування РНК Двофазне поділ Повнота виділення РНК з зразка Близька до 100%.
РНК повністю залишається в розчині, так як немає поділу і перенесення фаз Нестабільний відсоток виходу РНК аж до помилково негативні результати при випадковому засмоктуванні мікроосадка РНК з дна пробірки в процесі промивки Вплив сторонніх домішок в пробі В процесі виділення РНК не відбувається виділення ДНК. Не потрібно додавати ДНК-ази Одночасно з РНК виділяється ДНК. Додавання ДНК-аз обов'язково Захист від перехресної контамінації від «проби до проби» і можливої контамінації продуктами ПЛР Практично повний захист, так як пробірка після внесення біологічного матеріалу ні разу не відкривається, не потрібно додавати додаткові реагенти Високий ризик контамінації поверхонь і проб під час аерозольного розбризкування в процесі великої кількості маніпуляцій захист персоналу лабораторії При збереженні цілісності пробірки гарантується практично повний захист персоналу лабораторії від інфекційного агента Персонал лабораторії наражається на ризик зараження інфекційним агентом і шкідливому впливу гепатотропних токсичних реактивів Стадії виділення РНК 1 стадія - прогрівання при 90 ° С 15 стадій Стадії загальної процедури пробопідготовки 3 стадії:

• перемішування (вортексірованіе)
• погреваніе
• центрифугування

20-25 стадій (в залежності від модифікації методу) Час на обробку 100 проб 30 хв 2-2,5 години Витрата лабораторного пластику Істотно знижується витрата лабораторного пластику Потрібні додаткові пробірки й наконечники із-за необхідності перенесення розділених фаз Необхідність наявності витяжної шафи Не потрібно Обов'язкова наявність витяжної шафи через високу токсичність фенолу і хлороформу

КОМПЛЕКТ ДЛЯ ПРОВЕДЕННЯ ОТ-ПЦР

КОМПЛЕКТ ДЛЯ ПРОВЕДЕННЯ ОТ-ПЦР - набір для якісного і кількісного виявлення РНК вірусу гепатиту С (ВГС, HCV) всіх генотипів в сироватці / плазмі крові з діагностичними цілями при лабораторній діагностиці вірусного гепатиту С методом полімеразної ланцюгової реакції.

КЛІНІЧНА ЗНАЧИМІСТЬ ДЕТЕКЦІЇ РНК ВГС ЗА ДОПОМОГОЮ КОМПЛЕКТА ДЛЯ ПРОВЕДЕННЯ ОТ-ПЦР

• Діагностичне підтверджує дослідження позитивного результату серологічного тестування на антитіла до ВГС (anti-HCV)
• Діагностичне підтверджує дослідження у серонегативних осіб
• Рання діагностика вірусного гепатиту С
• Визначення показань до призначення противірусної терапії
• Контроль ефективності противірусної терапії
• Контроль перинатальної передачі вірусу гепатиту С

СКЛАД НАБОРУ РЕАГЕНТІВ ПОЛІГЕП-С БІОТІТР:

А. Комплект для виділення РНК ВГС «РНК-ЕКСПРЕС»

Реагент РНК-ЕКСПРЕС

110 пробірок (по 200 мкл)

Позитивний контрольний зразок 5 пробірок (по 300 мкл) Негативний контрольний зразок 5 пробірок (по 300 мкл)

Б. Набір реагентів для постановки реакції ОТ-ПЦР FRT

1. Реакційна суміш 1 пробірка (1500 мкл) 2. Taq-полімераза 1 пробірка (100 мкл) 3. Зворотна транскриптаза 1 пробірка (30 мкл) 4. Разбавитель 1 пробірка (по 2 мл) 5. Дітіотрейтол (DTT) 1 пробірка (30 мкл) 6. Інгібітор рибонуклеаз 1 пробірка (70 мкл) 7. Позитивний контроль ПЛР 2 пробірки (по 45 мкл) Формат
кількісний 1. Реакційна суміш 1 пробірка (1500 мкл) 2. Taq-полімераза 1 пробірка (100 мкл) 3. Зворотна транскриптаза 1 пробірка (30 мкл) 4. Разбавитель 1 пробірка (по 2 мкл) 5. Дітіотрейтол (DTT) 1 пробірка (30 мкл) 6. Інгібітор рибонуклеаз 1 пробірка (70 мкл) 7. Калібрувальна проба 103 копій РНК / мл 2 пробірки (по 45 мкл) 8. Калібрувальна проба 104 копій РНК / мл 9. Калібрувальна проба 105 копій РНК / мл 10. калібрувальна проба 106 копій РНК / мл

Завантажити інструкцію із застосування