- Основи діагностики захворювання
- Опис діагностичного методу
- Показання і цілі виконання
- Інтерпретація результатів кількісного ПЛР-тесту
- Спірні моменти інтерпретації результатів
Наявність сучасних препаратів проти гепатиту B (HBV) з чіткими показаннями для їх призначення вимагає точної і швидкої верифікації діагнозу. Однак з огляду на мізерних клінічних даних на перших тижнях хвороби і обмеженості імуноферментних методів аналізу, швидкість постановки діагнозу знижується.
Присутність маркерів анти-HBc IgM, HBsAg, анти-HBc, HBeAg, анти-HBe дозволяють підтвердити HBV або встановити факт перенесеної хвороби. Але визначити присутність активних вірусних частинок в крові і порахувати їх число на момент проведення дослідження можна за допомогою ПЛР - кількісного real-time тесту з виявлення гепатиту B. Метод, в порівнянні з імуноферментними способами діагностики, вирішує діагностичні проблеми і дозволяє прогнозувати перебіг хвороби на тлі прийому противірусних препаратів.
Основи діагностики захворювання
Діагностика гепатиту B ґрунтується на оцінці клінічних проявів, імуноферментних і інструментальних методів досліджень. Захворювання протікає в гострій фазі після інкубаційного періоду і, в залежності від дози інфекції та ефективності лікування, переходить в хронічну стадію. Головною метою лікування залишається запобігання хронізації, тобто елімінація всіх вірусних частинок з крові. Клінічна норма перебігу хвороби - лікування без подальшої віремії.
Факт усунення інфекції необхідно довести кількісним методом дослідження.
Оскільки будь-який якісний імуноферментний аналіз дозволяє діагностувати HBV побічно, тобто не показують наявність збудника у внутрішньому середовищі організму, а характеризує імунну відповідь на інфекцію, то контроль ефективності терапії і факт лікування стає важко довести. Тому пацієнту з гепатитом B або з наявністю діагностичних критеріїв в його користь повинна проводитися полімеразна ланцюгова реакція з метою кількісного визначення числа вірусних частинок в крові. Діагностична норма - це відсутність копій ДНК инфекта.
Опис діагностичного методу
Високочутливий метод ПЛР-діагностики гепатиту В відноситься до категорії генно-інженерних молекулярно-біологічних досліджень. За допомогою нього визначається кількість вірусної ДНК в біологічному матеріалі пацієнта і допустима норма. За отриманими результатами встановлюється число вірусних частинок в одиниці об'єму. Матеріалом для діагностичного тесту є венозна кров пацієнта. Забір бажаний натщесерце через можливого впливу хілозної сироватки на результат дослідження.
Отримані результати необхідно надати лікаря для інтерпретації і визначення подальшої тактики. Самостійна розшифровка не представляє діагностичної цінності.
Значимість результату числа вірусних частинок, отриманого методу ПЛР, перевищує значення імуноферментних досліджень. Оскільки аналіз в режимі real-time показує присутність збудника захворювання в крові, його інформативність вище інших. Якщо ІФА свідчать тільки про наявність антитіл, що спостерігається з 4-х тижнів інкубаційного періоду і зберігається понад 8 тижнів після елімінації вірусу з крові, то полімеразна ланцюгова реакція однозначно підтверджує активну перебіг захворювання або його лікування, характеризує динаміку призначеної терапії.
Полімеразна ланцюгова реакція з кількісним визначенням часток збудника вирішує діагностичні питання на користь припинення лікування в зв'язку з одужанням або продовження терапії через її недостатню ефективність. Метод максимально специфічний по відношенню до вірусу HBV і відрізняється прийнятною похибкою.
Показання і цілі виконання
Кількісний аналіз гепатиту B є найбільш достовірним і дозволяє підтвердити дані, отримані імуноферментними методами. Він призначається при:
- отриманні позитивного діагностичного результату ІФА;
- лікуванні пацієнта з встановленим діагнозом вірусного ураження печінки;
- при діагностиці гепатитів змішаної етіології;
- при необхідності визначення вірусного навантаження у пацієнта.
Оскільки більш широко в практиці інфекціоніста застосовується метод імуноферментного аналізу, то частина пацієнтів з легким перебігом хвороби можна лікувати і не вдаючись до необхідності підрахунку вірусного навантаження. Але ПЛР загальноприйнято вважається «золотим стандартом» діагностики в гепатології, так як через однозначності свого результату знімає ряд організаційних питань. Тому направлення пацієнта на кількісний аналіз переслідує такі цілі:
- отримання даних про кількість вірусних частинок в крові пацієнта;
- підтвердження гострого перебігу гепатиту і своєчасної верифікації хронізації захворювання;
- постійне виявлення латентних вірусоносіїв з позитивними ІФА-тестами, моніторинг їх виремии;
- прийняття рішення про призначення антивірусного лікування, його комбінування і припинення.
Найбільш значущою метою застосування кількісного ПЛР-тесту на виявлення HBV є визначення можливих комбінацій лікування. У випадках з високим вірусним навантаженням результат аналізу дає фахівцеві можливість приступити до комбінування препаратів. В ході терапії на підставі результату ПЛР легко визначити ефективність призначеного фармакологічного лікування. Керуючись тільки даними імуноферментних методів, не можна своєчасно визначити факт лікування і його поточну ефективність. Тому кількісний real-time тест - необхідний аналіз перед початком лікування гострого гепатиту, латентноговирусоносительства з високою віремією і хронічного HBV.
Інтерпретація результатів кількісного ПЛР-тесту
Розшифровка результатів кількісного ПЛР-тесту повинна проводитися лікарем пацієнта. Необхідно дати оцінку діагностичного показника і визначити терапевтичну тактику.
Стандартний аналізатор здатний видавати кількісний показник, який відображає число копій вірусної ДНК, присутніх в досліджуваній венозної крові. Одиниці виміру - копії / мл, МО / мл (копії на мілілітр, міжнародні одиниці на мілілітр). Розшифровка результатів наведена в таблиці із зазначенням різних одиниць вимірювання.
Копії / мл МО / мл Характеристика Тактика лікування Концентрація вірусу нижче діапазонного показника, норма Визначення тактики за клінічними даними, результатами біохімічного, імуноферментного, інструментального обстеження. 5 4 Помірна виремия Тактика визначається результатами біопсії печінки, біохімічного аналізу. > 105> 2 * 104 Висока виремия Показана противірусна терапія, помірний ризик хронізації. > 1 * 108> 4,8 * 107 Показник вище діапазону значень аналізатора Проведення комбінованої противірусної терапії з моніторингом виремии. Високий ризик хронізації HBV.
Аналізатор здатний видавати один якісний показник «не виявлено». Він означає, що ДНК вірусу в досліджуваному матеріали не були визначені, або їх число знаходиться нижче чутливості апарату (діагностична норма).
Аналізатор розподіляє значення в лінійному діапазоні концентрацій. У сучасних апаратах він визначений детектуючим ампліфікатором і знаходиться в межах від 750 до 1 * 108 копій на мілілітр. У міжнародних одиницях на мілілітр - від 360 до 4.8 * 107.
Спірні моменти інтерпретації результатів
Розшифровка показників, які визначає кількісний ПЛР-аналізатор, дозволяє зробити єдино можливе висновок про стан пацієнта. Однак існує значення, що викликає неоднозначні трактування. Результат «не виявлено» може свідчити як про повну відсутність вірусних частинок гепатіпа В, так і про їх низькому числі, тобто нижче лінійного діапазону, улавливаемого детектуючим ампліфікатором. Оскільки аналіз проводиться після позитивного імуноферментного тесту, то ймовірність контакту з вірусом велика. Це або умовна норма (Поствакцинальна реакція), або мала виремия після зараження. Тактика спостереження, як і при помірній виремии, повинна включати аналіз амінотрансфераз і ультрасонографию печінки з повторним проведенням ІФА.
В інших клінічних ситуаціях розшифрувати кількісний тест ПЛР - значить вирішити діагностичні труднощі, які виникли через недоліки ІФА-досліджень. Це - остаточний метод, що дозволяє вирішити, чи присутній вірус в крові пацієнта, чи здатний він викликати розвиток хронічного гепатиту, або це норма клінічного перебігу. При цьому можливість виявлення ДНК HBV в інкубаційному періоді до моменту синтезу антитіл гарантує раннє виявлення. Це важливе діагностичне перевага, яке в значній мірі впливає на прогноз при необережному очевидному зараженні. Подібне може спостерігатися при зараженні оперує хірурга або пацієнта при переливанні крові.
