- Камери для підрахунку клітин
- Слайд-планшети для мікроскопічного дослідження
- Коефіцієнт конверсії для 10 мл сечі, взятої для центрифугування:
Кількісні методи визначення клітин в одиниці об'єму досі широко використовуються в роботі лабораторій різних напрямків. Проведено дослідження для оцінки відтворюваності результатів підрахунку за допомогою камери Горяєва і пластикових слайд планшетів для мікроскопічного дослідження осаду сечі.
Кількісні методи визначення клітин в одиниці об'єму досі широко використовуються в роботі лабораторій різних напрямків. Проведено дослідження для оцінки відтворюваності результатів підрахунку за допомогою камери Горяєва і пластикових слайд планшетів для мікроскопічного дослідження осаду сечі.
Використовуючи при підрахунку клітинних елементів формули з методичного посібника виробника, були досягнуті добрі результати. Проведені паралельні вимірювання показали, що робота з даними формулами дозволяє точно визначати кількість клітинних елементів.
Кількісні методи визначення клітин в одиниці об'єму зразків біологічних рідин і сьогодні широко використовуються в роботі лабораторій різних напрямків - загальноклінічних, мікробіологічних та ін.
В рамках клініко-лабораторних досліджень виконують підрахунок
- числа сперматозоїдів в 1 мл еякулята,
- числа лейкоцитів в лікворі
- концентрацію спор збудника сибірської виразки В. anthracis в вакцинної культурі [3, 4].
Камери для підрахунку клітин
На початку минулого століття для підрахунку клітин крові застосовувався апарат Тома - Цейсса, на зміну йому прийшла камера Предтеченского і, нарешті, з середини минулого століття для підрахунку клітин стали використовувати сітку камери Горяєва, що складається з 225 великих квадратів, 25 з яких розграфлена на 16 маленьких [2]. До теперішнього часу вона є основним інструментом підрахунку клітин при проведенні аналізу сечі за методом Нечипоренко [1].
Принцип формування сіток у всіх камерах один і той же.
Камери розділені на деяке число квадратів, різним чином згрупованих. Знаючи обсяг квадрата, можна зробити розрахунок і визначити кількість клітин в одиниці об'єму зразка.
Контрольних матеріалів для оцінки результатів дослідження сечі за методом Нечипоренко не існує. Не піддавайте камеру калібрування, жодна система зовнішньої оцінки якості не має в своєму арсеналі контрольних зразків, в роботі з якими потрібно застосовувати камеру Горяєва.
Таким чином, оцінити правильність отриманих результатів - справа непроста.
Слайд-планшети для мікроскопічного дослідження
Перед початком використання в роботі пластикових слайд-планшетів (Aptaca, Італія) для мікроскопічного дослідження осаду сечі та інших біологічних рідин ми вирішили провести дослідження, метою якого було оцінити точність і відтворюваність результатів підрахунку.
Як матеріал для дослідження були взяті зразки крові 16 хворих.
Підрахунок проводився трьома лікарями клінічної лабораторної діагностики , Які визначали кількість лейкоцитів за допомогою слайд-планшета і для порівняння - з використанням камери Горяєва.
В якості контрольних використовувалися дані, отримані на автоматичному гематологічному аналізаторі Сісмекс KX-21N.
Для перевірочного дослідження ми вибрали підрахунок формених елементів крові, а не сечі, в зв'язку з тим що контроль їх кількості можна здійснити автоматизованим способом.
- Камера Горяєва призначена для підрахунку формених елементів крові і клітинних елементів спинномозкової рідини. Площа камери - 9 мм ², глибина - 0,1 мм, обсяг - 0,9 мм ³.
- Слайд-планшет складається з ячейок, які забезпечені сіткою для підрахунку (3 × 3 мм) і покриті тонким прозорим пластикової платівкою. Кожна сітка поділена на 5 квадратів (1 × 1 мм), які, в свою чергу, розділені на 9 маленьких квадратів (0,333 × 0,333 мм).
Підрахунок вівся відповідно до інструкції, опублікованій на сайті компанії-виробника.
Середнє значення кількості лейкоцитів:
- отримане при дослідженні на автоматичному аналізаторі, склало 5950 ± 2407 × 109 / л (M ± SD),
- при підрахунку за допомогою камери Горяєва (середнє значення результатів аналізу, виконаного трьома лікарями) - 4916 ± 1794,4 × 109 / л,
- при використанні слайд-планшета (середнє значення, отримане трьома лікарями) - 9477 ± 3624 × 109 / л.
Результати підрахунку кількості лейкоцитів з використанням камери Горяєва і з використанням слайд-планшета достовірно відрізнялися від даних, отриманих на автоматичному аналізаторі Sysmex KX-21 N.
Результати підрахунку за допомогою камери Горяєва і на автоматичному аналізаторі, отримані двома лікарями з трьох, достовірно не відрізнялися, але істотно відрізнялися від значень, отриманих при роботі з слайд-планшетом.
Особливо важливо, що при використанні слайд-планшета були вище не тільки власне середні значення числа лейкоцитів, а й дисперсія отриманих результатів, яка виявилася достовірно більшою, ніж дисперсія результатів, отриманих із застосуванням автоматичної аналізатора.
У літературі знайти опис нашої проблеми або її вирішення нам не вдалося. Звернувшись до виробника за роз'ясненнями, ми отримали чудову інструкцію, в якій були відповіді на всі наші запитання.
Виявилося, що необхідно вибирати спосіб підрахунку елементів в залежності від клітинної зразка.
- При високій клітинної необхідно підрахувати кількість елементів в 5 різних малих квадратах, строго стежачи за тим, щоб підрахунок не проводився в одних і тих же квадратах.
- При низькій клітинної необхідно підрахувати кількість елементів в 10 різних малих квадратах, строго стежачи за тим, щоб підрахунок не проводився в одних і тих же квадратах.
Подальші підрахунки ведуться відповідно до формул, наведених нижче.
Коефіцієнт конверсії для 10 мл сечі, взятої для центрифугування:
Tμ = n / (kx N x 10) або Tml = (nx 1000) / (kx N x 10),
де
- n - кількість клітин, підрахованих в малих квадратах;
- N - кількість малих квадратів, в яких вівся підрахунок;
- k - 0,01111 - обсяг малого квадрата;
- 10 - кількість мілілітрів сечі, підданих центрифугированию;
- Tμ - кількість клітин в мікролітр;
- Tml - кількість клітин в мілілітрі.
Також методичний посібник містить формули для роботи зі зразками, зміст яких не повинен центрифугированию:
Tμ = n / (kx N) або Tml = (nx 1000) / (kx N).
Використовуючи даний підхід до підрахунку клітинних елементів, ми змогли домогтися гарних результатів. Проведені паралельні вимірювання показали, що робота з даними формулами дозволяє точно визначати кількість клітинних елементів.
Застосовуючи дані рекомендації, ми змогли використати слайд-планшет для мікроскопічного аналізу сечі, кількісного визначення за методом Нечипоренко, а також для підрахунку клітин в будь-якому біологічному матеріалі.
На наш погляд, ця тема представляє практичний інтерес, т. К. Камери для підрахунку клітин широко застосовуються і до цього дня. Своєї скромної публікацією ми відкриваємо майданчик для обговорення.
Список використаної літератури
1. Нечипоренко А. З. Визначення кількості лейкоцитів і еритроцитів в 1 мл сечі // Лабораторна справа. 1969. № 2. С. 121. 2. Предтеченський В. Є. Керівництво до клінічної мікроскопії. М .: Типо-літографія-ваї. Н. Кушнерев і Ко, 1901. 256 с. 3. Методичні вказівки. МУ 3.3.1.1112-02. Основні вимоги до вакцинним штамів сибиреязвенного мікроба для імунізації людей. (затв. Головним державним санітарним лікарем РФ 26.02.2002). 4. СП 3.3.2.561-96. 3.3.2. Медичні імунобіологічні препарати. Державні випробування і реєстрація нових медичних імунобіологічних препаратів. Санітарні правила (затв. Постановою Госкомсанепіднадзора РФ від 31.10.1996 № 33).
