1 Ганіна Є.Б. 1 Червінец Ю.В. 1 Шестакова В.Г. 1 Грудінін Н.В. 1 Кузнєцова В.С. 1 Прутенская Е.А. 2
1 Федеральне державне бюджетне освітня установа вищої освіти «Тверській державний медичний університет» Міністерства охорони здоров'я Російської Федерації
2 Федеральне державне бюджетне освітня установа вищої професійної освіти «Тверській державний технічний університет»
Мета роботи - охарактеризувати гістологічну картину стоматиту в експерименті на білих щурах і оцінити ефективність використання високоактивних культур лактобацил для його лікування. Досліди проводилися на 32 самках безпородних білих щурів масою 230 г в два етапи, що включають в себе дворазову обробку ротової порожнини щурів 9% -ний оцтової кислотою (КК) протягом 3 днів і застосування культури Staphylococcus aureus на 4-ту добу експерименту. З метою подальшого лікування стоматиту високоактивними штамами лактобацил щурів розділили на 5 серій (8 - в контрольній серії і по 6 - в досвідчених). Для гістологічного дослідження на 1, 3, 5, 6, 9 і 12-й день здійснювали забір біоптатів слизової оболонки ясен для виготовлення мікропрепаратів за стандартною методикою. Після обробки порожнини рота КК макро- і мікроскопічно виявлені ознаки запалення, які посилилися після впливу Staphylococcus aureus. Гістологічна картина слизової оболонки порожнини рота після застосування лактобацил наблизилася до интактной вже до 5-го дня лікування, в той час як в контрольній групі тільки до 12-ї доби експерименту і не у всіх тварин. Результати наших досліджень показали ефективність використання окремих високоактивних культур лактобацил для лікування захворювань порожнини рота, в тому числі бактеріального стоматиту.
стоматит
слизова оболонка порожнини рота
Staphylococcus aureus
запалення
лактобацили
1. Дзугаева І.І. Аналіз структури захворювань слизової оболонки порожнини рота і червоної облямівки губ, що реєструються у дорослого населення на прийомі в типовій стоматологічній поліклініці / І.І. Дзугаева, К.В. Умарова // Російський стоматологічний журнал. - 2014. - № 5. - С. 50-52.
2. Тідген К.В. Нові аспекти в профілактиці ускладнень гострого герпетичного стоматиту у дітей // Міжнародний журнал прикладних і фундаментальних досліджень. - 2015. - № 3-4. - С. 697-699.
3. Pillai SK, Wennersten C., Venkataraman L. et al. Development of reduced vancomycin susceptibility in methicillin-susceptible Staphylococcus aureus // Clin. Infect. Dis. - 2009. - 49. - 8. - P. 1169-1174.
4. індігенную лактобацили порожнини рота людини - кандидати в пробіотичні штами / Ю.В. Червінец [и др.] // Людина і здоров'я: Курський науково-практичний вісник. - 2012. - № 1. - С. 131-137.
5. Експериментальні методи відтворення гінгівіту / А.П. Левицький [и др.] // Інновації в стоматології. - 2013. - № 1. - С. 2-6.
6. Червінец Ю.В. Пробіотичний і адаптаційний потенціал лактобацил, перспективних для конструювання ефективних пробіотичних препаратів / Ю.В. Червінец, В.М. Червінец // Експериментальна і клінічна гастроентерологія. - 2016. - Вип. 126. - № 2. - С. 108.
7. Волкова О.В. Основи гістології з гістологічної технікою / О.В. Волкова, Ю.К. Єлецький. - М .: Медицина, 1982. - С. 304.
8. Ганіна Є.Б. Моделювання стоматиту, викликаного різними повреждающими агентами в умовах експерименту на тварин / Є.Б. Ганіна, Р.К. Сінгх // Журнал анатомії і гістопатології. - 2015. - Т. 4. - № 3. - С. 38.
9. Ганіна Є.Б. Морфологічні особливості слизових покривів порожнини рота при експериментальному стоматиті у щурів / Є.Б. Ганіна [и др.] // Морфологія. - 2016. - Т. 149, вип. 3. - С. 59.
10. Вивчення фармакологічної активності магнійсодержащіе гелю «Полікатан» на експериментальній моделі травматичного стоматиту / А.А. Спасів [и др.] // Вісник Оренбурзького державного університету. - 2006. - № 12-2 (62). - С. 238-240.
11. Ковач І.В. Активність індуцібельной синтази оксиду азоту при хронічному рецидивуючому афтозний стоматит / І.В. Ковач [и др.] // Медицина сьогодні і завтра. - 2015. - № 4 (69). - С. 16-19.
12. Ярцева А.А. Патофізіологічні основи застосування дисульфідів глутатіону в якості засобів профілактики і лікування хіміопроменеве оральних мукозитів у хворих на рак орофарингеальной області: дис. ... д-ра мед. наук (14.03.03) / ФГБУ ВПО «Військово-медична академія ім. С.М. Кірова »Міноборони РФ. - СПб., 2014. - 261 с.
13. Нассонов А.Ю. Профілактика контактного стоматиту при ортодонтичному лікуванні дітей з бронхіальною астмою: дис. ... канд. мед. наук (14.01.14) / Міносвіти РФ ФГАОУ ВО «Кримський федеральний університет ім. В.І. Вернадського »Мед. акад. ім. С.І. Георгіївського. - Сімферополь, 2016. - 188 с
Лікування захворювань слизової оболонки рота, зокрема стоматитів різної етіології, продовжує залишатися одним з найбільш складних і важливих розділів сучасної стоматології. Висока і неухильно зростаюча захворюваність населення країни гострим (первинним) стоматитом є актуальною проблемою сучасної медицини, незважаючи на численні дослідження в цій області. За даними Рибакова А.І., в 1978 р поширеність стоматиту серед населення нашої країни становила 5% від всіх запальних захворювань слизової оболонки порожнини рота, а в даний час частка стоматиту займає близько 53% [1; 2]. Поняття «стоматит» досить широке. З стоматологічних захворювань, напевно, жодне не має настільки різноманітного прояви і такого великого кількості причин, як стоматит. Залежно від шкідливого чинника розрізняють близько 10 видів стоматитів, що мають як загальні, так і специфічні симптоми. Однак причини виникнення стоматиту можуть бути об'єднані в наступні групи: травми, інфекційні агенти, алергія, системні захворювання. Складність лікування полягає як в різноманітності факторів, що викликають розвиток даного захворювання, так і в можливості поєднання кількох факторів, що веде до зміни виду захворювання або хронізації процесу. Застосовувані в даний час медикаментозні засоби в лікуванні стоматиту не дають бажаний результат, отже, необхідно шукати і апробувати нові й ефективні препарати.
Найбільш складно піддаються лікуванню бактеріальні стоматити. Вони викликані травмами слизової оболонки рота, наявністю каріозних порожнин в зубах, порушенням правил асептики і антисептики під час стоматологічних маніпуляцій і хірургічних втручань. Золотистий стафілокок - основний представник даної групи, що викликає стоматити бактеріальної природи. Завдяки високій резистентності мікроба до антибактеріальних препаратів, захворювання стафілококової етіології займають провідне місце серед всієї гнійно-запальної патології. Відомо, що багато штамів Staphylococcus aureus мають зниженою чутливістю до метициліну та ванкомицину, це робить терапію стафілококових інфекцій в деяких ситуаціях досить проблематичною [3]. Збільшення числа хворих з інфекційними захворюваннями порожнини рота підвищило інтерес до пробіотичним препаратів, які, на відміну від лікарських засобів, відновлюють власну мікрофлору, не завдаючи їй шкоди. Лактобацили мають найбільшу антагоністичну активність по відношенню до патогенної та умовно-патогенної мікрофлори, забезпечуючи стійкість слизових оболонок організму до колонізації Алохтонні мікрофлорою в шлунково-кишковому тракті. У зв'язку з цим є актуальним створення і впровадження в медицину високоякісних прибутків на основі регіональних біоваріантов лактобацил, виділених від здорових людей [4]. Експериментальні моделі, зокрема бактеріальних стоматитів, дозволяють оцінити ефективність застосування нових способів лікування інфекційно-запальних процесів ротової порожнини різної етіології.
Мета роботи: охарактеризувати гістологічну картину стоматиту в експерименті на білих щурах і оцінити ефективність використання високоактивних культур лактобацил для його лікування.
Матеріал і методи. Експеримент проводився на 32 самках безпородних білих щурів масою 230 г, протягом 12 днів в 3 етапи. Зміст, харчування, догляд за тваринами і виведення їх з експерименту здійснювали відповідно до вимог «Правил проведення робіт з використанням експериментальних тварин» (Додаток до Наказу МОЗ СРСР від 12.08.1977 № 755). Всі тварини містилися при подібних умовах відносно температури, вологості та освітлення, а також раціону харчування (комбікорм ПК-120-1, Росія). На проведення експериментів отримано дозвіл етичного комітету ГБОУ ВПО «Тверська ДМА» МОЗ РФ (протокол від 14 жовтня 2013). Перший етап експерименту: створення хімічної моделі стоматиту у всіх тварин шляхом щоденної протягом 3 днів обробки ротової порожнини 9% -ний оцтової кислотою (КК) [5]. Другий етап: на четверту добу створення біологічної моделі стоматиту на базі хімічної на всіх щурах шляхом одноразової обробки ротової порожнини культурою Staphylococcus aureus, виділеної від клінічно здорових дітей і підлітків м Твері і Тверській області. Третій етап: через добу лікування стоматиту, обтяженого бактеріальною інфекцією, шляхом дворазової протягом 7 днів обробки ротової порожнини досвідчених щурів культурами 3 видів Lactobacillus (Lactobacillus 11 зв., Lactobacillus 2 п. Рота, Lactobacillus 24 д. Ст. І їх комбінації). Ці штами лактобацил, виділені з порожнини рота здорових людей, володіють високими показниками адаптаційного і пробиотического потенціалу, в тому числі активністю по відношенню до патогенних і умовно-патогенних мікроорганізмів в експериментах in vitro [6]. На третьому етапі всі щури були розділені на 5 серій: 1 - без лікування (контрольна), 2 - лікування Lactobacillus 11 зв. (Досвідчена № 1), 3 - лікування Lactobacillus 2 п. Рота (досвідчена № 2), 4 - лікування Lactobacillus 24 д. Ст. (Досвідчена № 3), 5 - лікування комбінацією всіх трьох культур лактобацил (досвідчена № 4).
На 1, 3, 5, 6, 9 і 12-й день експерименту під загальним інгаляційним ефірним наркозом проводили забір біоптатів (ясна) для гістологічного дослідження. Після цього тварини виводилися з експерименту передозуванням парів ефіру. Виготовлення гістологічних препаратів проводилося за стандартною методикою, що включає фіксацію невеликих шматочків матеріалу в 12% -ному фосфатно-буферному розчині формаліну протягом 24 год., Промивання у воді протягом доби і заливку в парафін. Парафінові зрізи, отримані на мікротому HESTION ERM 3100 (HESTION, Австралія - Китай), обробляли в три етапи: депарафінірованіе, фарбування гематоксилін-еозином і зневоднення зрізів з наступним укладенням в бальзам [7]. Отримані зрізи досліджували з використанням світлового мікроскопа Olympus CX21 (Olympus Corporation, Китай) c вбудованою фотокамерою МС 10 (АТ «ЛОМО», Росія) і комплексу візуалізації МС (система фото- і відеодокументування на базі цифрової відеокамери). Обробка даних здійснювалася на комп'ютерній програмі MCview (базове програмне забезпечення фотокамери).
Результати дослідження та їх обговорення. До початку експерименту були оглянуті слизові оболонки ротової порожнини всіх тварин, ніяких ознак запалення виявлено не було. Слизова оболонка без видимих патологічних змін, які не кровоточить, волога, блідо-рожевого кольору. На гістологічних мікропрепаратах слизової оболонки ясен інтактних щурів картина відповідає нормі: епітелій без ознак ушкодження, в пухкої волокнистої сполучної тканини власної пластинки слизової зустрічаються окремі лімфоцити, плазматичні клітини і рідкісні макрофаги, вогнища запалення не встановлені (рис. 1а).
На 4-ту добу експерименту (після 3 днів застосування кислоти) у всіх щурів в ротовій порожнині була відзначена виражена гіперемія, набряк слизової оболонки ясен. На мікропрепаратах - стаз крові в деяких судинах мікроциркулярного русла, інфільтрація власної пластинки слизової нейтрофільними лейкоцитами (рис. 1б). Приблизно у половини опитаних тварин зафіксовано наявність вогнищевих уражень порожнини рота у вигляді афт і виразок, а також петехій, внаслідок руйнування поверхневих шарів слизової оболонки. У окремих щурів на тлі зазначених змін з'явилися ознаки ангулярного хейлита, почали формуватися гнійні вогнища [8].
Через добу після обробки ротової порожнини щурів культурою Staphylococcus aureus (на 5-ту добу експерименту) розвинувся бактеріальний стоматит. Про це свідчать як зовнішні ознаки запального процесу, так і мікроскопічні [9]. При огляді ясен у всіх щурів було виявлено наростання ознак запалення слизових покривів: виражена гіперемія і набряк, петехії, сформовані гнійні вогнища. У багатьох тварин значно збільшується обсяг лейкоцитарного інфільтрату, який трансформується в гнійний мішок у вигляді валика в області різцевого частини ясен нижньої щелепи, також стаз крові в судинах мікроциркулярного русла. На гістологічних мікропрепаратах візуалізуються розрізнені клітини поверхневого шару епітелію і більш глибоко лежачих його шарів, а також руйнування клітин, лейкоцитарна інфільтрація підлеглих тканин і крововиливи (рис. 1в).
Рис.1 Десна щури. Забарвлення гематоксилін - еозином. Ув. х 400
А - интактная; Б - після впливу оцтової кислоти; скупчення макрофагів, нейтрофілів, тучних клітин під базальноїмембраною (стрілка);
В - після обробки культурою Staphylococcus aureus, розпушення і порушення цілісності епітелію (стрілка)
На 6-ту добу (через день після обробки культурами Lactobacillus) і аж до закінчення експерименту спостерігалася картина поступового «повернення» слизових покривів ясен більшості щурів до інтактних станом. При візуальному огляді виявлялося зменшення набряклості м'яких тканин ясен і обсягу гнійних валиків, зниження числа гнійних вогнищ і виразок в порожнині рота до повного їх зникнення. Виявлено поступове відновлення поверхневого епітеліального шару, а також більш глибоко розташованих його шарів, зниження концентрації нейтрофілів, плазматичних клітин, макрофагів під базальноїмембраною до окремо можна зустріти клітин (рис. 2а).
Мал. 2 Десна щури на 12 - й день експерименту. Забарвлення гематоксилін - еозином. Ув. х 400. А - 7-му добу лікування культурою Lactobacillus 11 зв., окремі макрофаги і нейтрофіли під базальноїмембраною; Б - контроль, нейтрофильная інфільтрація (стрілка)
У щурів контрольної серії, які були оброблені КК і Staphylococcus aureus, але не піддавалися лікуванню культурами Lactobacillus, запальний процес слизової оболонки рота мав ті ж прояви, що і у тварин дослідних серій. Однак, на відміну від них, клінічна картина була яскравіше: на гістологічних препаратах зазначалося розпушення і порушення цілісності епітеліального шару. За часом запальний процес тривав довше, і до 12-го дня у половини тварин фіксувалися його ознаки, на мікропрепаратах - нейтрофильная інфільтрація (рис. 2б). У досвідчених серіях до закінчення експерименту, навпаки, в 100% випадків ознаки запалення ні візуально, ні на мікропрепаратах виявлені не були.
На базі створеної нами біологічної моделі стоматиту були отримані дані, які дозволяють оцінити ефективність його лікування у щурів високоактивними штамами лактобацил. Культури лактобацил насамперед впливають на Staphylococcus aureus, як основну причину розвитку бактеріального стоматиту.
Аналіз літератури показує, що, незважаючи на різні ініціальні моменти розвитку стоматиту, гістологічні зміни в слизовій оболонці порожнини рота при ерозивно-виразковій стадії захворювання схожі (А.А. Спасів, 2006 р .; А.А. Ярцева, 2014 р .; І .В. Ковач, 2015 р .; А.Ю. Нассонов, 2016 г.) [10-13]. У своїй роботі А.А. Спасів відтворював термічний опік слизової оболонки порожнини рота в області верхніх різців кроликів породи шиншила шляхом нанесення розпеченого червоного штопфером. Через добу об'єктивно відзначали наростання запальної реакції - набряклості, гіперемії, інфільтрації навколишніх тканин, нагноєння ран. Звертало на себе увагу наявність запального інфільтрованою крайового валика. На 11-13-ту добу експерименту клінічно відзначали зниження набряклості, гіперемії, інфільтрації навколишніх тканин [10]. У нашому експерименті ми спостерігали ті ж ознаки запалення з утворенням гнійних мішків у вигляді валика в області різцевого частини ясен. В експерименті А.Ю. Нассонова показана гістологічна картина при травматичному стоматиті у білих щурів. Травма наносилася шляхом поверхневого лінійного розрізу на ясенний поверхні. На 3-ю добу в осередку ураження в підепітеліальному шарі ясна визначалися щільні запальні інфільтрати, представлені лімфоцитами, гістіоцитами і нейтрофілами, одиничними огрядними клітинами і еозинофілами, стаз еритроцитів у деяких судинах мікроциркулярного русла. На 5-у добу експерименту гістологічна картина біоптатів свідчила про те, що в тканинах зберігалися ексудативно-некротичні процеси. Визначалися набряк, порушення кровообігу у вигляді повнокров'я, стаза, були присутні крововиливи. На 10-ту добу дослідження визначалися регенераторні процеси, але запальний інфільтрат зберігався. До 14-го дня експерименту епітелізація була завершена [13].
Висновок. Таким чином, отримані нами результати узгоджуються з даними інших авторів. А.А. Спасів і А.Ю. Нассонов описали такі ж зміни клінічної та гістологічної картини слизової оболонки ясен в відповідні терміни. Однак у доступній літературі описані травматичні моделі стоматиту. У нашому експерименті вплив КК на слизову ясен було посилено культурою Staphylococcus aureus. Об'єктивно прояви стоматиту були виражені яскравіше, що максимально наблизило модель до реальної клінічній картині, так як дане захворювання нерідко супроводжується бактеріальною інфекцією.
Дослідження, пов'язані з моделюванням стоматиту, ведуться давно, але вивчення морфогенезу експериментального стоматиту залишається актуальною проблемою і в даний час. В результаті роботи багатьох авторів були створені різні лікарські препарати, розроблені методики, що успішно застосовуються для лікування даного захворювання, проте пошуки більш ефективних засобів тривають.
бібліографічна ПОСИЛАННЯ
Ганіна Є.Б., Червінец Ю.В., Шестакова В.Г., Грудінін Н.В., Кузнєцова В.С., Прутенская Е.А. Гістологічна картина стоматиту В експерименті на щурах // Сучасні проблеми науки та освіти. - 2017. - № 5.;
URL: http://www.science-education.ru/ru/article/view?id=26783 (дата звернення: 16.07.2019).
Пропонуємо вашій увазі журнали, что видають у видавництві «Академія природознавства»
(Високий імпакт-фактор РИНЦ, тематика журналів охоплює всі наукові напрямки)
Ru/ru/article/view?
