Мета дослідження. Порівняльне вивчення концентрацій асоційованого з вагітністю α2-глікопротеїну (АБГ), α2-макроглобуліну (МГ), трофобластического β1-глобуліну (ТБГ) і лактоферину (ЛФ) на ранніх термінах гестації і перед розродження, в сироватці крові жінок, вагітність у яких індукована програмами ЕКО, в порівнянні з фізіологічно настала вагітністю.
Матеріал і методи. Сироваткові концентрації АБГ, α2-МГ (методом кількісного ракетного іммуноелектрофореза) ЛФ і ТБГ (методом ІФА) визначалися у 37 жінок в програмах ЕКЗ (20 - до контрольованої стимуляції яєчників і на 15-й день після перенесення ембріона, 17 - перед розродження) і у 65 жінок з фізіологічно настала вагітністю (15 вагітних на термінах гестації 3-5 тижнів і 50 - з доношеною вагітністю перед пологами).
Результати. У пацієнток, що вступають в програми ЕКО, спостерігається знижений рівень α2-МГ в порівнянні зі здоровими жінками, а на ранніх термінах гестації при індукованих вагітностях виявляється низька сироваткова концентрація ТБГ і підвищений рівень АБГ в порівнянні з фізіологічно настала вагітністю. Однак концентрація перерахованих вище білків в групі ЕКО і контрольній групі при доношеною вагітності не відрізняється.
Висновок. Виявлені відмінності результатів дослідження у пацієнток в програмах ЕКЗ (до вступу в програму і в терміни 3-5 тижнів вагітності) від здорових невагітних жінок і від фізіологічно вагітність свідчать про залишкові проявах запальних процесів і функціональної неспроможності синцитіотрофобласту на ранніх термінах гестації після ЕКЗ. Однак в разі позитивного результату програми ці зміни повністю компенсуються до пологів.
Сучасні підходи до діагностики та лікування безпліддя засновані на досягненнях фундаментальних наук в галузі вивчення молекулярно-генетичних процесів, що лежать в основі реалізації процесу репродукції у людини [1]. Розробка і впровадження в клінічну практику допоміжних репродуктивних технологій (ДРТ) стали найважливішим і принципово новим етапом в лікуванні безпліддя [2]. Для підвищення результативності програм ДРТ необхідно подальше вивчення молекулярних механізмів запліднення in vitro і розвитку вагітності на ранньому терміні гестації. Останнім часом все більша увага приділяється вивченню ролі універсальних імунорегуляторних білків в механізмах запліднення і виношування. До них відносяться білки сімейства макроглобуліном: α2-макроглобулин (МГ), асоційований з вагітністю α2-глікопротеїн, або «білок вагітності» (АБГ), і асоційований з вагітністю протеїн А (PAPP-A). α2-МГ - основний представник даного сімейства, неспецифічний інгібітор протеїназ, модулятор синтезу цитокінів, а також білок, який здійснює і регулює транспорт цитокінів, гормонів та ліпідів до клітин, що бере участь в процесингу та презентації антигенів, що впливає на антителогенез, контролюючий поділ і апоптоз клітин [ 3-5]. Зміст в крові резервних білків АБГ і РАРР-А, що беруть участь в механізмах запліднення і пролонгування вагітності, зростає пропорційно терміну вагітності [3, 5-7]. Останнім часом до числа імунорегуляторних білків, що беруть участь в механізмах запліднення, відносять і лактоферин (ЛФ), локально синтезується епітеліальними клітинами і нейтрофілами. Крім антибактеріальних і антиоксидантних властивостей, а також иммуномодулирующего впливу на синтез цитокінів [8, 9], ЛФ постакросомального регіону сперматозоїдів дозозависимо пригнічує взаємодію гамет [10], імовірно з метою запобігання поліспермії. Будучи також острофазового реактантом, ЛФ може бути використаний в якості «маркера готовності» до проведення ДРТ у пацієнток з трубно-перитонеальним фактором безпліддя [11].
Однак досліджень по зміні змісту даних білків в сироватці крові у пацієнток з індукованими програмами ЕКО вагітностями в порівнянні з фізіологічно настала вагітністю не тільки на ранніх термінах, але і перед пологами до сих пір не проводилося, що і стало метою даного дослідження.
Матеріали і методи дослідження
У дослідження включено 20 учасниць результативних програм ЕКЗ з трубно-перитонеальним фактором безпліддя запального генезу у віці 30,6 ± 0,5 років. Обстеження жінок проводилось в динаміці: до початку програми ЕКЗ і на 15-й день після перенесення ембріона в порожнину матки. Індуковані вагітності в 73,6% закінчилися терміновими і в 26,4% - передчасними пологами.
Крім того, в дослідження були включені 17 жінок у віці 31,7 ± 1,1 року, з одноплідними вагітностями після ЕКЗ, обстежених перед плановим родоразрешением, в термінах 36-40 тижнів. Пологи закінчилися народженням здорових дітей з оцінкою за шкалою Апгар 8-9 балів.
Групи порівняння були представлені 15 вагітними у віці 20,3 ± 0,6 року на ранніх термінах гестації (3-5 тижнів), у яких вагітність наступила в природних циклах, а також 50 жінками порівнянного віку (23,5 ± 1,8 року ) з доношеною вагітністю, пологи яких закінчилися народженням здорових дітей.
До контрольної групи увійшли 30 здорових невагітних жінок у віці 23,6 ± 1,3 року.
Для визначення змісту α2-МГ і АБГ в крові вагітних використовувався метод кількісного ракетного іммуноелектрофореза і моноспеціфіческой антисироватки проти даних білків [12].
Рівень ЛФ і трофобластического β1-глобуліну (ТБГ) визначали методом твердофазного імуноферментного аналізу за допомогою тест-систем ЗАТ «Вектор-Бест».
Для статистичної обробки отриманих даних застосовували програму для біостатистики InStat 2.0 (Graph Pad, США). Статистично достовірними вважали відмінності між групами р
Результати дослідження
Сироваткові концентрації імунорегуляторних АБГ і ЛФ, а також синтезованого сінцітіотрофобластом ТБГ в групі жінок з індукованої вагітністю (ЕКО) до вступу в програму, а також на ранніх термінах гестації суттєво відрізнялися від показників при фізіологічно вагітність.
Перед вступом до програми ЕКЗ сироваткове зміст α2-МГ було знижено (в середньому на 13%) у порівнянні зі здоровими невагітними жінками (таблиця). Рівень АБГ достовірно не відрізнявся від контрольних показників. Концентрація ЛФ також була нижче, ніж у контрольній групі.
На ранніх термінах гестації (15-й день після перенесення ембріона) спостерігалося достовірне збільшення концентрації всіх вивчених показників. При цьому зміст АБГ і ЛФ в крові жінок з індукованої вагітністю перевищувало рівень даних білків при фізіологічній вагітності в порівнянних терміни, а концентрація ТБГ, навпаки, була знижені в середньому в 5 разів. Рівень α2-МГ в крові на ранніх етапах гестації був порівнянний і не залежав від способу настання вагітності.
Зовсім інші порівняльні дані були отримані при доношеною вагітності. Сироватковий рівень АБГ, ЛФ і ТБГ значимо зростав до кінця вагітності в порівнянні з його показниками на ранніх термінах гестації (3-5 тижнів) як при фізіологічно настала, так і при індукованої вагітності. Однак при доношеною вагітності в терміні 38-40 тижнів нами не виявлено жодних достовірних відмінностей між групою жінок, які брали участь в програмах ЕКЗ, і здоровими вагітними (таблиця).
Таким чином, виявляється при вступі до програми ЕКЗ знижений рівень α2-МГ, а також відмінності в концентрації ТБГ і АБГ на ранніх термінах гестації при індукованої вагітності в порівнянні з фізіологічно настала повністю компенсуються до пологів. Підвищення рівня імунорегуляторних α2-МГ, АБГ, ЛФ при індукованої вагітності на пізніх термінах відповідає його змін при фізіологічній вагітності.
Обговорення
Як показало проведене дослідження, при трубно-перитонеальному безплідді запального генезу досить часто спостерігаються залишкові явища хронічного запалення, що не проявляється клінічно, але який виявляється на молекулярному рівні, про що свідчить зниження сироваткових концентрацій α2-МГ (не тільки иммуномодулятора, а й пізнього негативного маркера запалення [3]) до вступу в програму ЕКО. Крім того, знижений рівень ЛФ, що є не тільки раннім позитивним реактантом запалення, а й основним фактором захисту слизових від бактеріальної та вірусної інвазії [9], дозволяє припустити вроджений або функціональний дефект його синтезу, що є однією з причин безпліддя трубного генезу внаслідок важко перенесеної інфекції .
Після стимуляції суперовуляції і перенесення ембріона значно підвищується рівень всіх вивчених показників. При цьому фізіологічна вагітність в порівнянних термінах гестації характеризується лише недостовірної тенденцією до підвищення вмісту АБГ. Частково виявляються відмінності в змісті α2-МГ і АБГ між цими групами можна пояснити впливом стимуляції суперовуляції, оскільки синтез даних білків гормонозавісім [5]. Крім того, підвищення рівня α2-МГ може пояснюватися ліквідацією залишкових явищ запалення на тлі метаболічних змін, що відбуваються при підготовці до ЕКЗ. Однак підвищений на ранніх етапах індукованої вагітності вміст у крові жінок АБГ (основного білка вагітності), супроводжуване зниженою концентрацією ТБГ (показника спроможності фетоплацентарної системи), в порівнянні з фізіологічною вагітністю в порівнянних терміни, може також свідчити про те, що формується фетоплацентарна система плоду в дебюті індукованої вагітності, особливо на тлі залишкових проявів запалення, в цілому не спроможна, і підвищення рівня АБГ, здатного стімулірова ть проліферацію, є компенсаторною реакцією організму матері, що дозволяє зберегти плід.
Підвищення концентрації ЛФ в сироватці крові жінок з індукованої вагітністю, визначається на 15-й день після перенесення ембріона, в порівнянні з його рівнем у сироватці крові жінок з фізіологічно настала вагітністю такого ж гестаційного терміну, також може мати кілька пояснень. З одного сторони, виконання процедур ДРТ (забір ооцитів, перенесення ембріонів) здатне викликати локальну запальну реакцію, при відсутності системної запальної реакції (на що вказує підвищення сироваткового рівня α2-МГ). У зв'язку з цим гіперсінтез ЛФ, що відносяться поруч авторів до білків вагітності [13], внаслідок активної участі в її розвитку може носити компенсаторний характер, спрямований на збереження плоду.
Так чи інакше, розвиток вагітності, як фізіологічно настала, так і індукованої, призводить до закономірного збільшення вмісту в крові активно беруть участь в розвитку плода АБГ, ЛФ і ТБГ. Рівень α2-МГ більш консервативний і не демонструє значних змін в загальній циркуляції. Однак найважливішим, на наш погляд, результатом був встановлений факт нормалізації сироваткового вмісту вивчених білків до доношеному терміну індукованої вагітності. Незважаючи на ряд несприятливих змін в рівні імунорегуляторних білків сироватки крові при безплідді трубного генезу, і на значні відмінності їх показників при спонтанної і індукованої вагітності на ранніх строках гестації, подальше неускладнений перебіг індукованої вагітності супроводжувалося нормалізацією показників даних білків і ТБГ до моменту розродження відповідно до їх рівнем при фізіологічно вагітність.
Таким чином, вирішальними факторами, що дозволяють виносити і народити здорову дитину при індукованої вагітності, є механізми нормалізації обмінних і синтетичних процесів, зміни в яких спостерігаються на початку програм ДРТ. У їх числі - синтез імунорегуляторних білків, що беруть участь як у розвитку вагітності, так і регулюючих запальні процеси, а також ТБГ.
висновки
- Перед тим як заступити до програми ЕКЗ у жінок з безпліддям трубного генезу відзначається знижений сироватковий рівень імунорегуляторних білків α2-МГ і ЛФ.
- У ранньому гестаційному періоді індукованої вагітності (ЕКО) спостерігаються виражені відмінності в показниках імунорегуляторних білків: АБГ, α2-МГ і ЛФ, а також ТБГ, в порівнянні з фізіологічно настала вагітністю. Ці відмінності можуть бути обумовлені як наявністю залишкових явищ запалення у жінок з трубно-перитонеальній формою безпліддя, так і активацією компенсаторних процесів, спрямованих на збереження плоду.
- Перед пологами сироватковий рівень вивчених імунорегуляторних білків і ТБГ у вагітних з індукованої вагітністю (ЕКО) не відрізняється від показників жінок з фізіологічно настала вагітністю, що свідчить про розвиток компенсаторних механізмів, що дозволяють виносити і народити здорових дітей в групі жінок з позитивним результатом програм ЕКЗ.
- Сухих Г.Т., Адамян Л.В. Репродуктивне здоров'я сім'ї. В кн .: Матеріали 2-го Міжнародного конгресу з репродуктивної медицини «Репродуктивне здоров'я сім'ї». М .; 2008: Додати 5-10.
- Подзолкова Н.М., Аншина М.Б., Колода Ю.А. Допоміжні репродуктивні технології. В кн .: Подзолкова Н.М., Кузнєцова І.В., Глазкова О.Л. Клінічна гінекологія. М .: МІА; 2009: Додати 224-56
- Зорін Н.А., Зоріна В.Н. Сигнальна система макроглобуліном. Огляд літератури. Біомедична хімія. 2012; 4: 400-10
- Birkenmeier G. Targeting the proteinase inhibitor and immune modulatory function of human alpha 2-macroglobulin. Mod. AsP. Immunobiol. 2001; 3: 32-6.
- Зорін Н.А., Левченко В.Г., Зоріна Р.М., Зоріна В.Н. Роль макроглобуліном в репродуктивної функції (Огляд літератури). Акушерство і гінекологія. 2005; 4: 7-9.
- Gonzalès J., Lesourd S., Van Dreden P., Richard P., Lefèbvre G., Vauthier Brouzes D. Protein composition of follicular fluid and oocyte cleavage occurrence in in vitro fertilization (IVF). J. Assist. Reprod. Genet. 1992; 9 (3): 211-6.
- Sinosich MJ, Ferrier A., Saunders DM Monitoring of postimplantation embryo viability following successful in vitro fertilization and embryo transfer by measurement of placental proteins. Fertil. Steril. 1985; 44 (1): 70-4.
- Vogel HJ, Schibli DJ, Jing W., Lohmeier-Vogel EM, Epand RF, Epand RM Towards a structure-function analysis of bovine lactoferricin and related tryptophan- and arginine-containing peptides. Biochem. Cell Biol. 2002; 80 (1): 49-63.
- Legrand D., Elass E., Carpenter M., Mazurer J. Lactoferrin: a modulator of immune and inflammatory responses. Cell. Mol. Life Sci. 2005; 62: 2549-59.
- Zumoffen CM, Gil R., Caille AM, Morente C., Munuce MJ, Ghersevich SA A protein isolated from human oviductal tissue in vitro secretion, identified as human lactoferrin, interacts with spermatozoa and oocytes and modulates gamete interaction. Hum. Reprod. 2013; 28 (5): 1297-308.
- Маркіна Л.А., Зоріна В.Н., Шрамко С.В., Зоріна Р.М., Архипова С.В., Баженова Л.Г. Зміст реактантов запалення в сироватці крові жінок при запальних захворюваннях придатків матки і беруть участь в програмі екстракорпорального запліднення. Клінічна лабораторна діагностика. 2008; 2: 15-7.
- Зорін Н.А. Високочутливі варіанти кількісного іммуноелектрофореза. Лабораторна справа. 1983; 10: 40-3.
- Ward PP, Paz E., Conneely OM Multifunctional roles of lactoferrin: a critical overview. Cell. Mol. Life Sci. 2005; 62: 2540-8.
Маркіна Любов Олексіївна, к.м.н., заст. головного лікаря по акушерству та гінекології МБЛПУ МКЛ № 1. Адреса: 654080, Росія, Новокузнецьк, вул. Бардіна, д. 34. Телефон: 8 (3843) 79-64-25. E-mail: [email protected] Зоріна Вероніка Миколаївна, доктор біологічних наук, старший науковий співробітник НДЛ імунології ГБОУ ДПО НГІУВ МОЗ Росії. Адреса: 654005, Росія, Новокузнецьк, вул. Будівельників, д. 5. Телефон: 8 (3843) 45-84-18. E-mail: [email protected] Гусятина Галина Миколаївна, головний акушер-гінеколог м Новокузнецька, зав. відділенням патології вагітності МБЛПУ Зональний перинатальний центр. Адреса: 654000, Росія, Новокузнецьк, вул. Сеченова, д. 26. Телефон: 8 (3843) 79-65-16. E-mail: [email protected] Ренге Людмила Володимирівна, к.м.н., заст. директора по акушерству та гінекології МБЛПУ Зональний перинатальний центр. Адреса: 654000, Росія, Новокузнецьк, вул. Сеченова, д. 26. Телефон: 8 (3843) 79-65-16. E-mail: [email protected]
Зоріна Раїса Михайлівна, д.б.н., в.н.с. НДЛ імунології ГБОУ ДПО НГІУВ МОЗ Росії. Адреса: 654005, Росія, Новокузнецьк, вул. Будівельників, д. 5. Телефон: 8 (3843) 45-56-41. E-mail: [email protected] Баженова Людмила Григорівна, д.м.н., професор, зав. кафедрою акушерства і гінекології ГБОУ ДПО НГІУВ МОЗ Росії. Адреса: 654005, Росія, Новокузнецьк, вул. Будівельників, д. 5. Телефон: 8 (3843) 79-68-47. E-mail: [email protected]
Зорін Микола Олексійович, д.б.н., професор, зав. НДЛ імунології ГБОУ ДПО НГІУВ МОЗ Росії. Адреса: 654005, Росія, Новокузнецьк, вул. Будівельників, д. 5. Телефон: 8 (3843) 45-84-18. E-mail: [email protected]
