У владі пухлини: чому метастази так складно зупинити?

1. причини органотропіі

Стаття на конкурс «біо / мовляв / текст»: Коли в організмі трапилося нещастя, і з 100 трильйонів нормальних клітин хоч одна переродилася в ракову і не була знищена, спрацьовує спусковий гачок, і запускається зростання пухлини. Поступово вона пристосовує до себе навколишні клітини, а також значно впливає на весь організм. З розвитком захворювання деякі ракові клітини залишають пухлина і формують метастази - вторинні вогнища пухлинного росту. Найчастіше своєчасне видалення первинної пухлини і післяопераційна терапія не здатні викликати ремісію. Виявляється, що первинна пухлина здатна «навчати» микроокружение в осередках розвитку майбутніх метастазів вже на ранніх етапах свого росту. Крім того, метастазне ракові клітини перепрограмують експресію своїх генів так, щоб краще прижитися в новому місці проживання. Знання того, як запобігти цим процесам, а не тільки зростання первинної пухлини, допоможе врятувати до 90% людей, які помирають від основних видів раку.

Ця робота опублікована в номінації «Вільна тема» конкурсу «Біо / мовляв / текст» -2017 .

Генеральний спонсор конкурсу - компанія «Діаем» : Найбільший постачальник обладнання, реагентів та витратних матеріалів для біологічних досліджень і виробництв.

Спонсором призу глядацьких симпатій і партнером номінації «Біомедицина сьогодні і завтра» виступила фірма « Інвітро ».

«Книжковий» спонсор конкурсу - « Альпіна нон-фікшн »

Зусилля багатьох онкологів протягом останніх десятиліть були спрямовані на встановлення деталей виникнення і розвитку раку - механізмів зародження пухлини і регуляції її активного зростання, формування сприятливого мікрооточення з клітин строми [2] . Ці знання безсумнівно привели до розробки нових підходів в терапії онкозахворювань. Згодом стало зрозуміло, що основна загроза раку укладена в здатності до поширення по організму. Так, деякі ракові клітини первинної пухлини (тобто розвинулася спочатку) відокремлюються від неї за рахунок епітеліально-мезенхімального переходу або інших механізмів [3] і, потрапляючи в кров або лімфоток, по маленьким капілярах подорожують в головні магістралі судинної системи. Вони залишають її за рахунок затримки в вузьких капілярах органів, адгезії до їх ендотеліальної стінці і виходу з просвіту судини в строму органу (рис. 1). Лише невеликий відсоток ракових клітин, які залишили первинну пухлину, досягає успіху в цьому процесі і виживає в новому середовищі. Ці клітини формують майбутні осередки зростання пухлини в нових органах - метастази.

Малюнок 1. Метастазирование і шляхи розсіювання ракових клітин.

Процес розсіювання ракових клітин по організму, названий метастазированием (від древнегреч. «Міняти, переносити»: meta - «через» + histanai - «встановлювати»), вперше описав ще в 1889 році Стівен Педжета [4] , Але механізм його розвитку залишався загадкою для вченого співтовариства довгий час (рис. 2).

Малюнок 2. Основоположники навчань про метастазуванні: англійський хірург Стівен Педжета (зліва) і американський патолог Джеймс Юінг (праворуч).

Педжета провів аналогію такого поширення ракових клітин з проростанням насіння. Вони теж виживають і діляться на плідної «грунті» - в потрібному мікрооточенні. В ті часи неможливо було знайти цього експериментального підтвердження, і довго переважала зовсім інша теорія - Джеймса Юінга (Рис. 2). Він стверджував, що основну роль у розподілі метастазів по організму грає динаміка кровотоку і пристрій судинної системи.

Нарешті в 1970-і роки в ході декількох експериментів по ін'єкції радіоактивно мічених ракових клітин мишам Ісаак Фідлер зміг довести, що результат метастазування також залежить від природи ракових клітин. В цьому випадку клітини меланоми розвивали метастази тільки в легких, але не в печінці, в судинах якої вони також затримувалися, але потім не виживали [5] .

Пізніше було встановлено ще більше фактів, що підтверджують, що ракові клітини різної природи метастазують переважно в певні органи і іноді навіть в заданій послідовності. Наприклад, клітини раку молочної залози - спочатку в кістки, печінку, лімфатичні вузли, легені, а потім вже в мозок; клітини раку шлунково-кишкового тракту і яєчників - в печінку і легені; раку простати - в основному, в кістки (рис. 1). Явище специфічного розподілу метастазів по організму назвали органотропіей метастазування. Найчастіше метастази зустрічаються в легенях, печінці та кістках.

Незважаючи на активні дослідження, в онкології все ще залишається багато питань без відповіді. Чи відрізняються метастазне ракові клітини від інших клітин первинної пухлини? Що лежить в основі органотропіі? Як метастази вдається вижити після видалення первинної пухлини і проведеної хіміотерапії ?

Генетична інформація лежить в основі програмування поведінки клітини. Переродження нормальних клітин організму в ракові (злоякісна трансформація) обумовлено мутаціями в генах-драйвери , Які призводять до неконтрольованого клітинного ділення. Крім таких вигідних для пухлинних клітин мутацій, також відбуваються мутації в генах-пасажирів, тобто тих, що з самого початку не мають впливу на ріст пухлини. З кожним поколінням, новим клоном всередині пухлини, накопичуються ці генетичні зміни, і деякі клони досягають успіху більше за інших, що стало основою для формування уявлення про еволюцію всередині пухлини. Одна із запропонованих гіпотез, чому деякі клітини пухлини набувають здатність до метастазування, заснована на подібному із злоякісною трансформацією принципі. По всій видимості, у них теж накопичуються мутації в генах-драйвери, які запускають цей процес . Однак експериментального підтвердження вона так і не знайшла, вчені сходяться на думці, що більшість клітин первинної пухлини здатні метастазировать. А ось що відбувається пізніше з геномами метастазне клітин?

В результаті порівняння геномів клітин первинних пухлин молочних залоз і їх локальних (в найближчих лімфатичних вузлах) і віддалених метастазів (у печінці, легенях, далеких лімфатичних вузлах) було встановлено, що геноми метастазів продовжують еволюціонувати в своїх осередках зростання незалежно від первинної пухлини [6] . Цікаво, що патерн мутацій схожий між метастазами в одному органі, але різний між метастазами в різних органах. Це означає, що ракові клітини на найглибшому рівні адаптуються до нового мікрооточення в залежності від зайнятої ними ніші. Вивчення генетичних змін при метастазуванні раку підшлункової залози виявило наявність різних субклонов (нових поколінь клону), які формують метастази. Однак відмінності між ними виявилися не більше, ніж між двома випадково взятими клітинами одного організму [7] .

Цікаво, що виявили як мінімум один ген, FBXW7, мутації в якому протидіють метастазування [8] . Відбувається це за рахунок посилення провоспалительной реакції, проліферації і активності T-лімфоцитів, які стимулюють формування адаптивного імунітету до пухлинних клітин. Таким чином, мутації в гені FBXW7 протидіють пухлинної іммунносупрессіі . Її прояви, такі як зменшення кількості лімфатичних судин і ефекторних T-лімфоцитів в первинної пухлини, пов'язані з ліцензуванням метастазування [8] .

Наступний щабель в регуляції експресії генів після безпосередніх змін в ДНК (мутацій, варіацій числа копій і т.д.) займають епігенетичні зміни (Метилювання гістонів, ДНК і ін.) (Рис. 3). За своєю природою вони більш пластичні, більш мінливі в порівнянні з генетичними змінами і підвладні впливу клітинної сигналізації, яка підлаштовується під вплив зовнішніх факторів. Виявилося, що епігенетичні код значно відрізняється в клітинах метастазів в порівнянні з первинною пухлиною. При раку підшлункової залози втрата великої кількості міток неактивного хроматину ( гетерохроматина ) - метилування гістонів (H3K9, H4K20) - і ослаблення метилування ДНК пов'язані з метастазуванням. Ці модифікації в ракових клітинах переводять ділянки гетерохроматину в активний стан, доступне для транскрипційних факторів , І в результаті посилюють експресію генів онкогенеза, таких як регулятори мезенхимального фенотипу , KRAS -сигналізації і метаболізму [9] .

Малюнок 3. Злоякісна трансформація і прогресування раку в перспективі генетичних і епігенетичних змін. Нормальні клітини тканини мають передбачувана поведінка - темпи проліферації, термін життя, характер взаємодії з іншими клітинами. При злоякісної трансформації накопичуються мутації, і поступово пухлина стає генетично гетерогенної (складається з декількох клонів, поколінь ракових клітин). Хіміотерапія знищує деякі клони, тоді як інші, з вигідними в нових умовах мутаціями, виживають і створюють нових клонів. Їх поведінка вже непередбачувано, тому що генетичні і епігенетичні зміни цих ракових клітин привели до придбання ними нових властивостей.

Епігенетична регуляція є одним з найважливіших механізмів програмування клітинного метаболізму. З ростом пухлини всередині неї утворюються області з недостатнім постачанням киснем (гіпоксією), так як до них не доходять кровоносні судини. Це викликає в ракових клітинах активацію гена фактора, індукованого гіпоксією (HIF-1α). Відбувається це за рахунок епігенетичного звільнення, деметилирования промотора гена, який стає доступним для транскрипційних факторів. Посилене утворення і активність білка HIF-1α, в свою чергу, регулює експресію генів безлічі метаболічних ферментів і транспортерів, що призводить до комплексних змін метаболізму ракових клітин і підтримує їх потреби.

Клітинний метаболізм розділений на процеси розщеплення з виділенням енергії ( катаболізм ) І утворення сполук з використанням енергії ( анаболизм ). Енергетичний обмін клітини протікає за рахунок етапів клітинного дихання - гліколізу, циклу трикарбонових кислот і окисного фосфорилювання. Ракові клітини по-своєму пристосовуються до збереження продуктивності енергетичного обміну в умовах нестачі кисню. У первинної пухлини вони, в основному, використовують гліколіз , А не окисне фосфорилювання, як в нормальних клітинах. Це посилене поглинання глюкози з перетворенням до лактату, що виділяється раковими клітинами, названо ефектом Варбурга . Він дозволяє їм вижити при гіпоксії і активно пролиферировать за рахунок використання проміжних сполук для біосинтезу і виділення енергії [10] .

Переважний спосіб генерування енергії у метастазів, однак, до сих пір мало вивчений. Використовуючи клітини раку молочної залози, що володіють широкою або специфічної органотропіей при метастазуванні, вчені виявили відмінності в метаболізмі первинної пухлини і метастазів. Ракові клітини, колонізували кістки і легені, активували використання окисного фосфорилювання, колонізували печінку - гліколіз. Коли ракові клітини колонізували всі перераховані вище вогнища, вони активували відразу обидва метаболічних шляху (рис. 4) [11] . Схоже, що така пластичність допомагає раковим клітинам освоїти нові ніші для колонізації. Наприклад, в печінці гликолитический фенотип підтримується при зростанні метастазів за рахунок активності згаданого раніше фактора HIF-1α, а також підвищеної експресії білка PDK1. Це фермент, який пригнічує формування з'єднання ацетил-КоА. І так як його потік на розвилці з гліколітичні шляхом в цикл трикарбонових кислот зменшується, посилюється утворення кінцевого продукту гліколізу - лактату [12] .

Малюнок 4. Відмінності в метаболізмі первинної пухлини і метастазів в різних органах. Умовні позначення: ОФ - окисне фосфорилювання; HIF-1α - індукований гіпоксією фактор 1; PDK1 - піруватдегідрогеназний комплекс 1.

Чому ж для метастазів в одному органі вигідніше використовувати переважно один вид метаболізму, ніж інший? Відповідь на це питання і роль різних факторів в регуляції метаболічної пластичності ракових клітин ще тільки належить дізнатися.

І все ж метастазне ракові клітини не можуть самостійно впоратися з настільки непростим завданням - освоєнням абсолютно незнайомого місця проживання. Експерименти групи Девіда Лідена в 2005 році вперше показали, що первинна пухлина за рахунок продукуються факторів стимулює формування так званих преметастазних ніш в різних органах. Вчені показали, що ракові клітини первинної пухлини за рахунок стимулювання рецептора фактора росту судин (VEGFR-1) на мієлоїдних клітинах-попередниках активують їх поширення з кісткового мозку в відомі осередки розвитку метастазів [13] . Крім того, в цих осередках запускається надлишкова експресія фибробластами одного з компонентів позаклітинного матриксу ( ВКМ ) - фібронектину. Мієлоїдний клітини-попередники, маючи рецептори клітинної адгезії ( інтегрини ) До цього білка, активно «ловляться на вудку» і заселяють преметастазние ніші. Вони секретують запальні цитокіни, фактори росту і проангіогенних чинники , Що стимулюють формування судин. Це сприяє ремоделированию строми і колонізації її метастазами (рис. 5) [13] .

Малюнок 5. Стадії розвитку метастазів. Праймінг, або навчання, майбутнього вторинного вогнища зростання первинної пухлиною; ліцензування - імуносупресія первинної пухлини, створення сприятливого мікрооточення в преметастазних нішах; ініціювання - початок метастазування і освоєння преметастазной ніші; прогресування - зростання метастазів у вторинному вогнищі.

Таким чином, в поточному поданні формування метастазів відбувається в кілька стадій. Починаючи з раннього зростання первинної пухлини відбувається праймінг - навчання майбутніх ніш розвитку метастазів за допомогою виділення різних факторів раковими клітинами, залучення клітин з кісткового мозку. Потім клітини строми первинної пухлини і преметастазних ніш (фібробласти, клітини мієлоїдного ряду , T-лімфоцити) формують сприятливе мікрооточення, ліцензуючи подальше розселення метастазів. Фаза ініціювання метастазування полягає в зростанні судин, ангіогенезі, за якими метастазне клітини залишають первинну пухлину і приходять в преметастазние ніші. Прогресування - це фінальний етап переходу мікрометастазів в макрометастазов - вторинні сформовані пухлини. Він може зайняти від декількох місяців до декількох років (рис. 5).

Хоча для більшості органів характерна ця загальна схема, існують деякі особливості в залежності від місця (органу) формування ніші. Наприклад, преметастазная ніша в печінці і легенях також формується за рахунок залучення нейтрофілів. Відомо, що вони можуть допомагати метастазуючим клітинам при інтеграції в нову нішу за рахунок секретірованія протеаз, цитокінів і безпосереднього контакту з раковими клітинами при виході з капілярів. Інший приклад - клітини раку підшлункової залози. Вони виділяють Екзосома - ліпідні везикули, які переносять макрофаг-інгібуючий фактор (MIF). їх поглинають клітини Купфера в печінці, і це запускає ланцюжок навчання ніші. Клітини Купфера синтезують трансформуючий фактор росту β ( TGF-β ), клітини Іто активуються їм і запускають перестроювання ВКМ, потім залучаючи до нього макрофагів [15] . Їх роль в мікрооточенні пухлини докладніше розглянута в статті « Обдурені макрофаги, або кілька слів про те, як злоякісні пухлини обманюють імунітет » [16] .

Метастази в кістках - одні з найпідступніших, і їх преметастазная ніша по-своєму особлива. Наприклад, виявилося, що при раку молочної залози тільки ракові клітини без рецепторів до естрогену метастазують в кістки. Такі клітини первинної пухлини активно виділяють фермент лізілоксідази . У кістках він викликає утворення дорослих остеокластів і за рахунок цього стимулює резорбцію кістки. [17] . Саме ці «ємності» всередині кістки метастази займають пізніше. Інша і, мабуть, основна функція лізілоксідази - формування поперечних зв'язків між колагеновими волокнами ВКМ - також пов'язана з утворенням преметастазних ніш, але в легких. Перетворення колагенових волокон привертає мієлоїдний клітини, а ті пізніше руйнують колагенові мережі і дають шлях раковим клітинам при заселенні тканини легені [18] .

При деяких типах раку, таких як меланома, для успішного метастазування в лімфатичні вузли і органи необхідно формування нових лімфатичних судин в їх преметастазной ніші. Нещодавно вчені встановили, що такий лімфангіогенез починається на ранніх стадіях росту первинної пухлини, і медіатором його запуску є фактор росту мідкін , Що секретується клітинами меланоми в складі екзосом або у вільному вигляді [19] .

Безумовно, механізми формування преметастазних ніш в комплексі дозволяють краще зрозуміти розвиток раку і не перестають дивувати своєю складністю.

причини органотропіі

Описані відмінності в специфічних механізмах формування ніш можуть служити одним з пояснень Органотропність метастазування, але як ракові клітини, які можуть метастазировать відразу в кілька органів, вибирають тільки один з них?

Ключовий механізм, відомий на даний момент, заснований на навчанні майбутніх вогнищ розсіювання метастазів за допомогою специфічних до них екзосом. Ці везикули, раніше описані в статті « Екзосома - механізм координації та взаємодопомоги клітин організму » [20] , Являють собою структури з рецепторами на своїй поверхні і генетичним і секретується матеріалом всередині. Вчені провели цікавий експеримент - виділили Екзосома від ракових клітин різного походження (раку грудей, підшлункової залози та ін.) І, запровадивши їх у кровотік мишей з відмінним типом пухлини, показали, що з їх допомогою можливо перепрограмувати розподіл метастазів по органам. Це обумовлено тим, що Екзосома різних типів раку переважно містять на своїй поверхні основні рецептори адгезії, інтегрини, специфічні до певного білка ВКМ (до ламінін - α6β4 і α6β1; до фібронектину - αvβ5 і т.д.).

Саме вони адресують доставку екзосом в певний орган, який переважно має цей специфічний ВКМ-білок у складі строми. Зливаючись з мембранами клітин строми того чи іншого органу, Екзосома доставляють вміст і запускають свою програму: в фібробластах легенів - через експресію одних генів S100 , В клітинах Купфера в печінці - через експресію інших. Активність цих генів стимулює клітинну сигналізацію і запальні реакції, які займаються навчанням преметастазной ніші (рис. 6) [21] .

Малюнок 6. Регуляція Органотропність метастазування за допомогою праймінга преметастазной ніші Екзосома зі специфічними рецепторами інтегринів. Умовні позначення: α6β4 і α6β1 - гетеродімери інтегріновие рецептора; Src / pSrc - пропорція неактивній / активної форм кінази.

Підіб'ємо підсумок: описані тут механізми, очевидно, ускладнюють картину перебігу онкозахворювань і розвитку тактик їх лікування. Важливо підкреслити, що гетерогенність первинної пухлини і метастазів по ряду розглянутих тут ознак (генетична, метаболічна, нишевая) дає розуміння того, що слід використовувати комбіноване і таргетной лікування на різних стадіях перебігу хвороби. Як підтвердження тому - результати одного з останніх досліджень, проведених на матеріалах пацієнта з рецидивами між курсами тривалої імунотерапії. Порівняння популяцій T-лімфоцитів з мікрооточення різних метастазів показало, що вони гетерогенні [22] і, отже, первинна, вторинні і т.д. пухлини по-різному відповідали на лікування.

Ми також знаємо, що після хіміотерапії часто виживають субклони ракових клітин з корисними в новому середовищі мутаціями. Під стресом впливу цитостатиків субклони ракових клітин активують секрецію факторів росту і запускають клітинну сигналізацію, що перешкоджає загибелі (рис. 7). Крім того, їх виживання допомагає підтримка клітин строми, заодно змінюють свою поведінку на «оборонне» під ефектом терапії.

Малюнок 7. Реакція метастазів на терапію, освіту резистентності і розвиток рецидиву. Умовні позначення: ІФР1 - інсуліноподібний фактор росту; ЕФР - епідермальний фактор росту; ГФР - фактор росту гепатоцитів; ПГЕ2 - простагландин 2; ВКМ - позаклітинний матрикс.

Виявлення преметастазних ніш і розуміння їх влаштування запропонували по-новому поглянути на розвиток підходів в терапії. Якби стало можливим запобігти формуванню преметастазних ніш, то з великою ймовірністю було б зупинено метастазування, а значить, і можливість ремісії. Будемо і далі стежити за проривами в цій області.

1. Shimpei I. Kubota, Kei Takahashi, Jun Nishida, Yasuyuki Morishita, Shogo Ehata, et. al .. (2017). Whole-Body Profiling of Cancer Metastasis with Single-Cell Resolution . Cell Reports. 20, 236-250;
2. Пухлинні розмови, або Роль мікрооточення в розвитку раку ;
3. Krakhmal NV, Zavyalova MV, Denisov EV, Vtorushin SV, Perelmuter VM (2015). Cancer invasion: patterns and mechanisms . Acta Naturae. 7, 17-28;
4. Stephen Paget. (1889). THE DISTRIBUTION OF SECONDARY GROWTHS IN CANCER OF THE BREAST. . The Lancet. 133, 571-573;
5. Fidler IJ (1970). Metastasis: quantitative analysis of distribution and fate of tumor emboli labeled with 125 I-5-iodo-2'-deoxyuridine . J. Natl. Cancer Inst. 45, 773-782;
6. Lucy R. Yates, Stian Knappskog, David Wedge, James HR Farmery, Santiago Gonzalez, et. al .. (2017). Genomic Evolution of Breast Cancer Metastasis and Relapse . Cancer Cell. 32, 169-184.e7;
7. Alvin P Makohon-Moore, Ming Zhang, Johannes G Reiter, Ivana Bozic, Benjamin Allen, et. al .. (2017). Limited heterogeneity of known driver gene mutations among the metastases of individual patients with pancreatic cancer . Nat Genet. 49, 358-366;
8. B. Mlecnik, G. Bindea, A. Kirilovsky, HK Angell, AC Obenauf, et. al .. (2016). The tumor microenvironment and Immunoscore are critical determinants of dissemination to distant metastasis . Science Translational Medicine. 8, 327ra26-327ra26;
9. Oliver G McDonald, Xin Li, Tyler Saunders, Rakel Tryggvadottir, Samantha J Mentch, et. al .. (2017). Epigenomic reprogramming during pancreatic cancer progression links anabolic glucose metabolism to distant metastasis . Nat Genet. 49, 367-376;
10. Слідом Варбург - останні досягнення у вивченні біоенергетики раку ;
11. JM Rosen, CT Jordan. (2009). The Increasing Complexity of the Cancer Stem Cell Paradigm . Science. 324, 1670-1673;
12. Fanny Dupuy, Sébastien Tabariès, Sylvia Andrzejewski, Zhifeng Dong, Julianna Blagih, et. al .. (2015). PDK1-Dependent Metabolic Reprogramming Dictates Metastatic Potential in Breast Cancer . Cell Metabolism. 22, 577-589;
13. Rosandra N. Kaplan, Rebecca D. Riba, Stergios Zacharoulis, Anna H. Bramley, Loïc Vincent, et. al .. (2005). VEGFR1-positive haematopoietic bone marrow progenitors initiate the pre-metastatic niche . Nature. 438, 820-827;
14. Yang Liu, Xuetao Cao. (2016). Characteristics and Significance of the Pre-metastatic Niche . Cancer Cell. 30, 668-681;
15. Bruno Costa-Silva, Nicole M. Aiello, Allyson J. Ocean, Swarnima Singh, Haiying Zhang, et. al .. (2015). Pancreatic cancer exosomes initiate pre-metastatic niche formation in the liver . Nat Cell Biol. 17, 816-826;
16. Обдурені макрофаги, або Кілька слів про те, як злоякісні пухлини обманюють імунітет ;
17. Thomas R. Cox, Robin MH Rumney, Erwin M. Schoof, Lara Perryman, Anette M. Høye, et. al .. (2015). The hypoxic cancer secretome induces pre-metastatic bone lesions through lysyl oxidase . Nature. 522, 106-110;
18. Janine T. Erler, Kevin L. Bennewith, Thomas R. Cox, Georgina Lang, Demelza Bird, et. al .. (2009). Hypoxia-Induced Lysyl Oxidase Is a Critical Mediator of Bone Marrow Cell Recruitment to Form the Premetastatic Niche . Cancer Cell. 15, 35-44;
19. David Olmeda, Daniela Cerezo-Wallis, Erica Riveiro-Falkenbach, Paula C. Pennacchi, Marta Contreras-Alcalde, et. al .. (2017). Whole-body imaging of lymphovascular niches identifies pre-metastatic roles of midkine . Nature. 546, 676-680;
20. Екзосома - механізм координації та взаємодопомоги клітин організму ;
21. Ayuko Hoshino, Bruno Costa-Silva, Tang-Long Shen, Goncalo Rodrigues, Ayako Hashimoto, et. al .. (2015). Tumour exosome integrins determine organotropic metastasis . Nature. 527, 329-335;
22. Alejandro Jiménez-Sánchez, Danish Memon, Stephane Pourpe, Harini Veeraraghavan, Yanyun Li, et. al .. (2017). Heterogeneous Tumor-Immune Microenvironments among Differentially Growing Metastases in an Ovarian Cancer Patient . Cell. 170, 927-938.e20;
23. Joan Massagué, Anna C. Obenauf. (2016). Metastatic colonization by circulating tumour cells . Nature. 529, 298-306.