Діагностика інфекцій, що передаються статевим шляхом (ІПСШ) методом ПЛР-аналізу

Діагностика інфекцій, що передаються статевим шляхом (ІПСШ) методом ПЛР-аналізу

Що таке ПЛР-аналіз?
ПЛР (полімеразна ланцюгова реакція) - найшвидший і достовірний метод діагностики інфекційних захворювань. Найчастіше його використовують для виявлення інфекцій, що передаються статевим шляхом (ІПСШ) і вірусних гепатитів .

Полімеразна ланцюгова реакція (Polymerase chain reaction) була відкрита Кері Б. Мюлліса в 1983 році, за що він і був удостоєний Нобелівської премії. Часто ПЛР описують як метод, за допомогою якого вчені можуть знаходити голку в стозі сіна і потім будувати стіг з цих голок. "Голкою" є крихітний фрагмент ДНК або РНК мікроорганізму, характерний тільки для даного виду збудника захворювання.
В якості досліджуваного матеріалу для ПЛР аналізу можуть використовуватися різні біологічні виділення (слиз, сеча, мокрота), зіскрібки епітеліальних клітин, кров, сироватка.

Метод ПЛР діагностики істотно доповнює спектр традиційних методів і аналізів, які використовуються в мікробіологічної діагностики. ПЛР діагностика ефективна для виявлення мікроорганізмів важко виявляються в лабораторних умовах, атипових форм бактерій, внутрішньоклітинних паразитів і мікроорганізмів, здатних тривалий час існувати в організмі господаря і викликати хронічні захворювання.

Як це роблять?
1. З біоматеріалу пацієнта в лабораторії за допомогою спеціальних реагентів виділяється шуканий ділянку ДНК / РНК.
2. Потім проводиться полімеразна ланцюгова реакція, в результаті якої кількість специфічних фрагментів збудника багаторазово збільшується в результаті чого стає можливою детекция.
3. Після цього за допомогою спеціальних маркерів визначається наявність (або відсутність) фрагмента ДНК / РНК мікроорганізму в біоматеріалу.

У лабораторії "Літех" використовуються надійні набори реагентів для виявлення ДНК збудників бактеріальних і вірусних інфекцій методом полімеразної ланцюгової реакції, що дозволяють контролювати не тільки інгібування і адекватність постановки реакції, але і інші параметри:
• коректність забору клінічної проби;
• ефективність пробоподготовки;
• помилки в проведенні аналізу (в т.ч. не внесення зразка в ампліфікаціонних суміш);
• контамінацію на ранніх стадіях (до стадії, яка зумовлює необхідність повтору аналізу).
Які особливості впливають на результати ПЛР аналізу?

Залежно від періоду інфікування і стану імунної системи у будь-якого пацієнта може бути негативний результат навіть при наявності інфекції.
У сумнівних випадках рекомендується провести повторний аналіз через 10-14 днів.

Як правильно підготуватися до здачі ПЛР-аналізу?
Вибір клінічного матеріалу для дослідження визначається найбільш імовірним місцем локалізації збудника. при аналізі ЗПСШ матеріал для дослідження у чоловіків - зішкріб слизової оболонки сечівника, який поміщається в пробірку зі спеціальним реагентом.
У жінок додатково береться на дослідження вміст піхви, цервікального каналу матки, уретри. Рішення про вибір матеріалу для дослідження приймається лікарем на підставі сукупності скарг пацієнта і клінічних проявів інфекції.
Взяття біологічного матеріалу, по можливості, повинно проводитися в період загострення інфекції. Кількість матеріалу, що забирається для дослідження, не повинно бути надмірним, тому що разом зі збудником в пробу потрапляють речовини, які можуть викликати гальмувати ПЛР або можуть сприяти руйнуванню ДНК при зберіганні і транспортуванні. При взятті мазків і зіскрібків достатню кількість матеріалу - розміром "з сірникову головку". Найбільш адекватним інструментом для взяття зіскрібків і мазків для ПЛР-аналізу є спеціальний одноразовий урогенітальний зонд (щіточка), який збирає необхідну кількість епітелію, не травмуючи слизову, майже не вбирає зразок і добре віддає зібраний матеріал в рідку транспортну середу.

рекомендації:
• приходьте на обстеження в період загострення інфекції;
• після незахищеного статевого контакту повинно пройти не менше трьох тижнів;
• закінчите прийом антибіотиків за 3 тижні до дослідження на ІПСШ;
• утримайтеся від статевих відносин протягом 36 годин;
• під час менструації дослідження не проводиться.
В день обстеження на наявність ІПСШ:
• Не проводьте туалет статевих органів, що не застосовуйте дезінфікуючі засоби і антибактеріальне мило.
• Від останнього сечовипускання до взяття матеріалу має пройти не менше 3 годин.
• Матеріал для дослідження у жінок слід брати перед менструацією або через 1-2 дня після її закінчення. Жінкам не можна спринцюватися; необхідно припинити введення будь-яких вагінальних свічок.
• За узгодженням з лікарем за 10 днів до взяття матеріалу на дослідження необхідно припинити прийом хіміопрепаратів і лікувальні процедури.
Які збудники можуть бути знайдені при ПЛР аналізі?

Bacteroides spp. (Бактероїди) - поразка жіночих внутрішніх статевих органів: цервіцити, ендометрити, аднексити, ВЗОМТ інфекції в малому тазу. Виявляють бактероїди і при простатитах, хронічних ускладнених уретритах.

Chlamydia trachomatis (Хламідія) - саме вона найчастіше причина негонококкового уретриту у чоловіків (23-55%)

Cytomegalovirus (Цитомегаловирус) - Цитомегаловірусна інфекція небезпечна при зараженні матері під час вагітності.

Epstein Barr virus (Вірус Епштейна-Барр) - інфекційний мононуклеоз або хвороба поцілунків, крім того є однією з причин лімфогранулематозу, причиною лімфоми Беркітта. У багатьох людей, заражених вірусом Епштейна - Барр, хвороба проходить безсимптомно. В даний час даного вірусу поряд з іншими герпесвирусами приписується важлива роль у формуванні пухлинних клітин в організмі людини.

Gardnerella vaginalis (Гарднерелла) - одна з причин БВ.

HPV (вірус папіломи людини) папіломавірусна інфекція, загострені кондиломи

HSV 1,2 герпес вірусна інфекція, генітальний герпес

Mobiluncus curtisii (мобілункус) - одна з причин БВ

Mycoplasma genitalium (Мікоплазма) - негонококові уретрити (12-25%), простатити.

Mycoplasma hominis Мікоплазма - негонококові уретрити, простатити, запальні захворювання матки і придатків, пієлонефрит.

Neisseria gonorrhoeae (Гонококк) - гонорея відноситься до "класичним" захворювань, що передаються статевим шляхом (венеричних хвороб). При цьому захворюванні можливе ураження сечівника (уретри), прямої кишки, глотки, шийки матки та очей.

Toxoplasma gondii (Токсоплазма) - Токсоплазмоз є однією з так званих TORCH-інфекцій (переклад перших букв латинських назв інфекцій: токсоплазма, краснуха, цитомегаловірус, герпес), що є небезпечними для плоду.

Trichomonas vaginalis (Тріхомонада) - Трихомоніаз є одним з найбільш поширених венеричних захворювань. У жінок вражається піхва, у чоловіків - сечовипускальний канал і передміхурова залоза.

Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum, Ureaplasma spp. негонококовий уретрит викликається Ureaplasma urealyticum (20-40%) уреаплазми є умовно-патогенними мікроорганізмами. Вони здатні викликати ряд захворювань, але в той же час нерідко їх виявляють і у здорових людей.