Боровко А.Н., ветеринарний лікар, ТОВ «АТ Біофарм»
Антибактеріальні хіміотерапевтичні препарати, до яких відносяться антибіотики і синтетичні протимікробні засоби, широко застосовуються у ветеринарії для профілактики і лікування захворювань, що викликаються мікроорганізмами.
Природний відбір на тлі широкого застосування антибіотиків і синтетичних протимікробних засобів в гуманної і ветеринарної медицини постійно призводить до появи резистентних штамів мікроорганізмів. На стороні мікробів - високий потенціал спадкової мінливості, на стороні людства - міць науки і обмежені пристосувальні ресурси прокаріот, до яких відносяться бактерії.
Прокаріоти з'явилися на Землі близько 3,5 мільярдів років тому. Тварини, як царство еукаріот, - близько 700 млн. Років тому. 3 мільярди років еволюція бактерій протікала під час відсутності інших таксонів. Бактерії еволюціонували в умовах конкурентної боротьби один з одним. Одним з видів зброї в цій боротьбі стали антибіотики - природні сполуки, які використовуються бактеріями для придушення або знищення собі подібних. Одночасно з появою антибіотиків у бактерії почали з'являтися і успадковуватися способи їх нейтралізації. Тобто історія появи резистентності бактерій до антибіотиків налічує мільйони, якщо не мільярди років. Оскільки всі патогенні бактерії походять від непатогенних прокаріотів, вони, безсумнівно, використовують закріплену в геномі за цей гігантський період часу інформацію, що дозволяє їм успішно протистояти впливу антибіотиків.
На відміну від природних антибіотиків, їх модифіковані аналоги і синтетичні антибактеріальні засоби з'явилися, за історичними мірками, тільки сьогодні. Сальварсан, органічна сполука миш'яку, з'явився в 1912 році. Пронтозил, перше синтетичне протимікробний засіб з групи сульфаніламідів, - в 1935 році. Перший модифікований антибіотик - метицилін був випущений в 1960 році. Для нейтралізації дії синтетичних препаратів бактерії не можуть використовувати генетичний матеріал, накопичений за мільярди років еволюції, тому, теоретично, синтетичні протимікробні препарати меншою мірою, ніж антибіотики, здатні приводити до селекції стійких штамів бактерій.
Цей логічний висновок підкріплюється експериментальними і спостережливими даними. Gautam Dantas, Morten OA Sommer і інші [1] вивчили стійкість до 18 антибіотиків 75 ізолятів ґрунтових бактерій, що належать до наступних таксонів: Burkholderiales (41% ізолятів), Pseudomonadales (24%), Enterobacteriales (13%), Actinomycetales (7%) , Rhizobiales (7%), і Sphingobacteriales (6%). Встановлено, що з 18 антибіотиків, що належать до 8 груп, резистентність в найменшій мірі спостерігалася до фторхінолонів, левоміцетину, триметоприму, сульфаніламідів і аміноглікозидів. З 5 груп антимікробних засобів, до яких бактерії були чутливі, 3 - є синтетичними.
Згідно широко поширеній думці практичних лікарів, високу чутливість і повільне утворення резистентності бактерії проявляють саме до синтетичних антибактеріальних засобів (фторхинолонам, триметоприму, сульфаніламідів, нітрофуранам, метронидазолу), а також до напівсинтетичних, хімічно модифікованим антибіотиків (пеніцилінів, цефалоспоринів, макролідів, тетрацикліну, аминогликозидам ).
Таким чином, основний спосіб підвищення ефективності протимікробної терапії - це застосування «незнайомих» для мікроорганізмів, які не зустрічаються в природі протимікробних засобів.
Класифікація
Антибактеріальні засоби можна класифікувати за типом дії і хімічною структурою (див. Таб.1).
Таблиця 1. Класифікація антибактеріальних хіміотерапевтичних засобів.
Група
Підгрупи і типові представники
Тип дії
Механізм дії
Швидкість вироблення резистентності у бактерій
Природні, напівсинтетичні або синтетичні аналоги природних
Містять бета-лактамні кільце
Пеніциліни (пеніцилін, амоксицилін)
бактерицидний
Порушують синтез клітинної стінки під час ділення
Повільно (до природних - швидко)
Цефалоспорини (цефазолін)
Карбапенеми (іміпенем)
Монобактами (азтреонам)
глікопептиди
ванкоміцин
містять аміноцукор
Аміноглікозиди (стрептоміцин, гентаміцин)
Бактріостатіческій, рідше бактерицидний
Порушують синтез білка на рівні рибосом
Повільно (у стрептоміцину - швидко)
Містять 4 конденсованих шестичленних циклу
Тетрацикліни (доксициклін)
повільно
похідні діоксіамінофенілпропана
Амфеніколи (левоміцетин, фторфенікол)
Містять макроциклічні лактонное кільце
Макроліди (еритроміцин)
Повільно (у еритроміцину - швидко)
лінкозаміди
лінкоміцин
швидко
Ансаміціни
рифампіцин
Порушують синтез РНК
поліпептиди
Поліміксини (колістин, бацитрацин)
бактерицидний
Порушують функцію клітинних мембран
повільно
поліефіри
саліноміцин
бактерицидний
синтетичні
сульфаніламіди
сульфаметоксазол
бактеріостатичний
Порушують синтез РНК
повільно
диаминопиримидина
триметоприм
бактеріостатичний
нітроімідазол
метронідазол
бактерицидний
Порушують синтез ДНК
Дуже повільно
нітрофурани
фуразолідон
фторхінолони
енрофлоксацин
Механізми резистентності до антибактеріальних хіміотерапевтичних засобів
Резистентність мікроорганізмів до антибіотиків і синтетичним антибактеріальних засобів виникає шляхом мутацій і рекомбінації геномів. Причому самі антибактеріальні засоби є лише фактором відбору змінених клітин.
Бактерії здатні отримувати генетичну інформацію, що кодує резистентність, не тільки при вертикальній передачі від материнської клітини до дочірнім, але і при горизонтальній передачі за допомогою плазмід, траспозонов і вірусів, а також при кон'югації і трансформації. Потомство зміненої бактеріальної клітини, якщо ці зміни закріпилися в геномі, буде стійко в тій чи іншій мірі до антибактеріальній засобу або до цілої групи таких засобів, якщо механізм резистентності є загальним для всієї групи препаратів. Так виникає перехресна стійкість до багатьох препаратів однієї або навіть декількох групи. Типовий приклад - перехресна резистентність до бета-лактамних антибіотиків.
Резистентність до антибактеріальних засобів забезпечується наступними основними механізмами:
1. Запобігання попадання антимікробний засіб в клітку (левоміцетин)
2. Прискорення виведення антимікробних засобів з мікробної клітини (фторхінолони)
3. Руйнування або зміна антимікробний засіб в клітці або в зовнішньому середовищі (бета-лактами, аміноглікозиди)
4. Модифікація рецептора-мішені до антимікробному засобу, що робить неможливим їх з'єднання (тетрациклін, сульфаніламіди, фторхінолони)
5. Освіта обхідного метаболічного шляху, не блокується антибактеріальним засобом (сульфаніламіди, триметоприм)
Мікроорганізмам складніше виробити резистентність до протимікробну засобу, якщо вони використовують механізм модифікації рецептора-мішені, а протимікробний засіб впливає на 2 і більше рецепторів. Фторхінолони одночасно впливають на ДНК-гіразу і топоізомеразу IV бактерій. Частота мутацій у бактерій невисока. Наприклад, ймовірність виникнення у туберкульозних мікобактерій мутацій, які опосередковують стійкість, становить: 3,32 x 10-9 на одну поділку клітини для рифампіцину; 2,56 x 10-8 для ізоніазиду; 2,29 x 10-8 для стрептоміцину; 1,0 x 10-7 для етамбутолу. Імовірність виникнення одночасно двох мутацій, що призводять до зміни двох рецепторів, в цьому випадку менше 10-15, що значно менше популяції бактерій в організмі. Так само зникаюче мала ймовірність виникнення в одній мікробної клітці генетичної інформації, що кодує резистентність одночасно до двох антибактеріальних препаратів. Однак з часом, з допомогою горизонтального переносу генетичної інформації, резистентність все ж може з'явитися.
З метою нейтралізації вже з'явилася стійкості бактерій до антибактеріальних засобів використовують три основні методи:
1. Хімічна модифікація природних антимікробних засобів (наприклад, використання напівсинтетичних макролідів замість природного еритроміцину)
2. Використання інгібіторів мікробних ферментів, що руйнують антибіотики (наприклад, використання пеніцилінів разом з інгібітором бета-лактамаз - клавулановою кислотою)
3. Використання синтетичних протимікробних засобів, проти яких у бактерій немає механізмів стійкості
Для запобігання появи резистентності у чутливих штамів мікроорганізмів необхідно:
1. Не застосовувати антибіотики без явної необхідності
2. Антимікробні препарати застосовувати в рекомендованих дозах, витримуючи курс лікування
3. Чергувати антибактеріальні препарати з різних груп
4. Комбінувати 2 або більше антибактеріальних препарату
Дорога плата за резистентність
Прокаріоти (див. Рис.1), до яких відносяться бактерії, мають набагато більш слабкими захисними і компенсаторні можливості в порівнянні з еукаріотамі, до яких належимо ми з вами. У прокаріот відсутні мітохондрії, що забезпечують еукаріот енергією. Через це енергетичні можливості бактерій значно нижче. Немає ЕПР, апарату Гольджі, лізосом, клітинного ядра, відсутня ендоцитоз. Прокаріотичні клітини менше еукаріотичних в 100-1000 разів. Будь-яка зайва синтезируемая бактеріями молекула погіршує їх шанси в конкурентній боротьбі. Тому резистентні бактерії під час відсутності селекційного фактора, антимікробноїпрепарату, поступово витісняють резистентними бактеріями. Таким шляхом відновлюється чутливість штамів бактерій після закінчення певного періоду часу, коли бактерії не піддавалися впливу антибактеріального препарату. За клінічними спостереженнями цей термін становить від кількох місяців до кількох років.
Малюнок 1. Будова клітини прокаріотів (цитується на підставі ліцензії Creative Commons Attribution-ShareAlike)
Стратегія і тактика застосування антибіотиків у ветеринарній медицині
Дезінфекція, гігієна змісту
Необхідно знизити кількість патогенних бактерій у зовнішньому середовищі, оскільки вона, поряд з організмом тварини, є резервуаром збудників інфекційних захворювань. Об'єктом дезінфекції є конструкційні поверхні, годівниці, поїлки та інше обладнання. Для зниження мікробного забруднення повітряного середовища і створення сприятливого мікроклімату важливо підтримувати нормальні параметри повітрообміну, температури, вологості і освітленості в тваринницьких приміщеннях.
Застосовуємо те, що ефективно
Як не парадоксально, ветеринарний лікар, який обслуговує великі господарства, часто має більше можливостей для постановки правильного етіологічного діагнозу і визначення чутливості виділеної мікрофлори до антибактеріальних засобів, ніж лікар гуманної медицини, що має справу з одним пацієнтом і, в більшості випадків, що застосовує антимікробну терапію емпірично, без лабораторної діагностики чутливості до антибактеріальних препаратів.
Застосування ефективних проти даного збудника препарату або препаратів - критично важливо для успіху антимікробної терапії.
Існує кілька методів визначення чутливості до антибактеріальних препаратів, найважливіші з яких диско-дифузійний метод і метод послідовних розведень. Диско-дифузійний метод дешевше і простіше, але метод послідовних розведень точніше і дозволяє визначити мінімальну інгібуючу концентрацію препарату для даного мікроорганізму. Для об'єктивної оцінки чутливості виділеної культури бактерій до антибактеріальних препаратів, необхідно виконати декілька умов. Нижче перераховані основні помилки, що призводять до необ'єктивного результату.
Диско-дифузійний метод:
1. Підвищений або занижене змісту антимікробноїпрепарату в диску
2. Невірна оцінка зони затримки росту бактерій
3. Невірна інтерпретація зони затримки росту бактерій
4. Невідповідна живильне середовище
Метод послідовних розведень:
1. Помилки при виготовленні розчину антимікробноїпрепарату (невідповідний розчинник, неповне розчинення, помилки в розрахунках концентрації)
2. Невідповідна живильне середовище
3. Невірна оцінка зростання або відсутності росту бактерій
Об'єктивні результати при використанні обох методів можна отримати тільки при ретельній стандартизації всіх етапів дослідження.
Сама неочевидна, але, можливо, найпоширеніша помилка - застосування невідповідної живильного середовища. Оскільки катіони двовалентних металів негативно впливають на активність багатьох антибактеріальних засобів, зокрема тетрацикліну і фторхінолонів [2], їх зміст мало б перевищувати 35 мг / л для Mg2 + і 100 мг / л для Са2 +. Крім того, концентрація тимідину повинна бути менше 50 нг / л, оскільки тимін і тимидин перешкоджають прояву антибактеріальних властивостей сульфаніламідів і триметоприму. Для контролю середовища на наявність антагоністів сульфаніламідних препаратів і триметоприму рекомендується використовувати штам Enterococcus faecalis ATCC 29212. При величині зони пригнічення навколо диска, що містить 1.25 / 23.75 мкг триметоприму / сульфаметоксазолу, 20 мм і більше середу слід визнати задовільною за якістю.
Живильне середовище також повинна бути стерильною і підходящої для зростання випробуваного штаму мікроорганізмів.
Антимікробна активність in vitro та in vivo може значно відрізнятися. Це пов'язано з помилками визначення антимікробної активності в лабораторних умовах, а також з фармакокінетичними особливостями антибактеріальних препаратів, зокрема з їх вибірковим накопиченням в окремих органах і тканинах, швидкістю виведення і утворенням метаболітів, які можуть бути більш активними або менш активними, ніж вихідна речовина. Буває так, що речовина, яка продемонструвала в лабораторних умовах більш високу антибактеріальну активність, після застосування на тварин показує менший терапевтичний ефект, ніж речовина, яка продемонструвала in vitro меншу активність.
комбіновані препарати
Останнім часом практичні ветеринарні лікарі більшу увагу приділяють антимікробних засобів, що містять 2 або 3 компонента. Це пов'язано з більшою терапевтичною ефективністю таких препаратів. Якщо препарат застосовується «в сліпу», без визначення чутливості виділених патогенних штамів до компонентів препарату, то ймовірність отримати очікуваний ефект зростає в 2-3 рази. Якщо препарат застосовується після визначення чутливості, то, лікар закономірно очікує посилення ефекту, що може навіть служити підставою до зниження дози.
Посилення ефекту, тобто синергізм, має місце не при всіх поєднаннях антимікробних препаратів. Поєднання бактерицидних антибіотиків, що діють в момент поділу мікробної клітини, з бактеріостатичними препаратами (наприклад, пеніциліну з сульфаніламідом) призводить до зниження ефекту. Суммационного синергізм, при якому ефект від поєднання дорівнює сумі ефектів, зустрічається при поєднанні препаратів, що належать до однієї групи антимікробних засобів, що володіють одним механізмом дії (наприклад, поєднання бензилпеніциліну і оксациллина). Потенційований синергізм, при якому ефект від поєднання більше, ніж проста сума ефектів, зустрічається при поєднанні препаратів з різним механізмом дії. Одним із прикладів такого вдалого поєднання є препарат «Тріфлон», що містить енрофлоксацин і триметоприм. Енрофлоксацин - протимікробний засіб широкого спектру дії з групи фторхінолонів. Механізм дії пов'язаний з пригніченням бактеріальної ДНК-гірази, що призводить до порушення реплікації ДНК бактерій. Триметоприм - протимікробний засіб широкого спектру дії з групи диаминопиримидина. Механізм його дії пов'язаний з пригніченням бактеріальної редуктази дигідрофолієвої кислоти. Бактеріальна дигідрофолатредуктази в 50-100 тисяч разів чутливіші до триметопримом, ніж у тварин і людини. Триметоприм блокує один з етапів синтезу нуклеїнових кислот - утворення тетрагідрофолієвої кислоти з дигідрофолієвої, яка є субстратом для синтезу нуклеїнових кислот бактерій. Таким чином, обидва препарати у мікробів діють на різні ланки одного і того ж процесу - синтезу нуклеїнових кислот, що є передумовою для прояву потенцированного синергізму.
При поєднанні антібактеріальніх ЗАСОБІВ хіміотерапевтічного Дії важліво враховуваті фармакокінетичні Параметри компонентів, Які повінні володіті примерно однаково періодом напіввіведення и пронікаті в місця локалізації Збудник. І триметоприм і енрофлоксацин, внаслідок своєї високої Ліпотропні, здатні проникати у важкодоступні для більш гідрофільних речовин місця, створювати там достатні для прояву вираженого антибактеріальної дії концентрації.
Запобігання інактивації антибактеріальних засобів
Деякі антибактеріальні хіміотерапевтичні засоби чутливі до ингибирующим факторів зовнішнього середовища.
Біодоступність тетрацикліну і фторхінолонів різко знижується в присутність іонів кальцію, магнію, заліза, міді, свинцю. Зміна рН середовища в сторону від оптимальної знижує біодоступність макролідів і фторхінолонів, руйнує пеніциліни. Фотодеградацію під дією сонячного світла схильні фторхінолони. Сульфаніламіди втрачають свою активність при призначенні з новокаїном. Пеніциліни нестійкі при підвищеній температурі.
Для запобігання фізичної або хімічної інактивації антибіотиків слід застосовувати їх не у вигляді чистих субстанцій, а у вигляді готових лікарських препаратів, що містять речовини, що запобігають інактивацію в кормі або питну воду. Необхідно також оберігати антибіотики від іонів металів, поміщаючи в неметалічний посуд і використовувати для приготування розчинів нежорстку воду, в ідеалі - дистильовану воду.
Для запобігання інактивації бета-лактамних антибіотиків (пеніцилінів і цефалоспоринів) бета-лактамазами мікроорганізмів корисно поєднання їх з інгібіторами бета-лактамаз (клавуланова кислота, сульбактамом, тазобактамом).
Збереження нормальної мікрофлори
Важливим завданням під час антибактеріальної хіміотерапії є збереження нормальної мікрофлори організму тварини. Порушення нормального мікробного біоценозу, особливо біоценозу кишечника, призводить до дисбактеріозу - станом, коли нормальна мікрофлора заміщається незвичайної, або коли звичайна мікрофлора локалізується в незвичайних для себе місцях. Типовим прикладом дисбактеріозу є заміщення нормальної мікрофлори кишечника грибками роду Candida або анаеробами роду Clostridia. Відповідно розвивається кандидоз або некротичний ентерит.
Для запобігання розвитку дисбактеріозу слід застосовувати антибіотики вузького спектра дії, що в реальному житті вступає в протиріччя з завданням, яке вирішує лікар при нез'ясованої етіології збудника. У гуманній медицині давно встановлено, що найчастіше дисбактеріоз викликають такі антибіотики, як левоміцетин, тетрациклін, кліндаміцин. У ветеринарії скасування кокцідіостатіческіх антибіотиків - іонофоров іноді призводить до виникнення некротичного ентериту.
Якщо є можливість, необхідно використовувати антибактеріальний препарат не системного, а локальної дії, наприклад, колістин, який не всмоктується в кишечнику і діє тільки в його просвіті. Місцево на шкірі і слизових оболонках слід замість антибіотиків застосовувати антисептики, до яких у мікроорганізмів резистентність майже не виробляється.
Дисбактеріоз, викликаний одним антибактеріальним препаратом, нерідко доводиться лікувати із застосуванням іншого препарату, що впливає на заміщену мікрофлору.
Фармакокінетичні особливості дії антибактеріальних препаратів
З фармакокінетичних параметрів антибактеріальних засобів для практичного лікаря мають значення такі параметри, як біодоступність, накопичення в певних органах і тканинах, період напіввиведення і шляхи виведення препарату.
Біодоступність, тобто ступінь всмоктування препарату, відображає частку препарату, що надійшла в кров. Біодоступність залежить, перш за все, від хімічної природи речовини, розмірів його частинок (чим менше, тим вище біодоступність), лікарської форми, наявності допоміжних речовин, виду тварини, властивостей води або корму, а також стану кишечника (при оральному шляху введення). Вище йшлося про вплив іонів металів на біодоступність. При оральному введенні велике значення має стан кишечника. При проносах надійшли з водою або кормом антибактеріальні засоби можуть не встигнути всмоктатися слизовою оболонкою кишечника і не надати свою дію.
Ліпофільні, добре розчинні в жирах речовини здатні легко проникати через мембрани клітин і створювати в органах і тканинах високі концентрації, значно більші, ніж в крові. До таких препаратів належать триметоприм, фторхінолони, макроліди. Наприклад, тілмікозін, макролідних антибіотиків, накопичується у птахів в тканинах легенів і повітроносних мішків в концентрації, що перевищує концентрацію в крові відповідно 25 разів і в 16 разів [3]. Гідрофільні речовини, до яких відносяться пеніциліни і цефалоспорини, гірше проникають через клітинні бар'єри і тому більш ефективні при септицемії, ніж при внутрішньоклітинних інфекціях. Амфіфільних речовини, до яких відносяться фторхінолони, виявляють змішані властивості.
Період напіввиведення препарату, тобто час, протягом якого його концентрація падає в 2 рази, необхідно враховувати при розрахунку періодичності дачі препарату. Збільшення періоду дачі препарату понад рекомендованого призводить до зниження терапевтичної ефективності і зростання ризику розвитку резистентності. Поширеною помилкою є введення добової дози препаратів, що мають період напіввиведення 6-12 годин (наприклад, енрофлоксацину), з питною водою протягом робочого дня, тобто за 8 годин. При цьому концентрація енрофлоксацину протягом залишилися до наступного введення 6-8 годин нижче мінімальної інгібуючої концентрації.
Шляхи виведення препарату слід враховувати з метою досягнення високої концентрації препарату в місці локалізації патогенних мікроорганізмів. Наприклад, гентаміцину сульфат практично не всмоктується в кров при оральному введенні і виводиться з калом. При оральному введенні гентаміцин ефективний проти шлунково-кишкових патогенів, а при ін'єкційному шляху введення - при захворюваннях сечовивідних шляхів, оскільки, в цьому випадку, на 90% виводиться з сечею.
У разі локалізації збудника на шкірі і слизових оболонках успішна антимікробну терапія буває, як правило, тоді, коли хіміотерапевтичне засіб діє через кров «зсередини» організму, а антисептик - зовні, з боку шкіри або слизової оболонки. Одностороннє вплив часто неефективно.
Важка для практичного лікаря ситуація може виникнути при локалізації збудника на поверхні важкодоступних слизових оболонок дихальних шляхів і сечостатевих органів, коли не вдається знищити збудника застосовуючи тільки системний антимікробний препарат, а антисептик неможливо застосувати через анатомічних особливостей.
Застосування пробіотиків і пребіотиків
Застосування пробіотиків (сапрофітних мікроорганізмів) і пребіотиків (речовин, що стимулюють ріст нормальної мікрофлори), а також кислот, що обмежують ріст патогенної мікрофлори, не може розглядатися, як альтернатива антибактеріальної хіміотерапії. Витіснити патогенну мікрофлору, особливо в шлунково-кишковому тракті, без хіміотерапевтичних препаратів дуже непросто. Набагато більшу перспективу має застосування пробіотиків в період хіміотерапії, якщо пробіотичний мікроорганізм нечутливий до дії хіміотерапевтичного засобу (наприклад, Saccharomyces cerevisiae) або безпосередньо після неї. Це дозволяє не допустити розвиток патогенної мікрофлори до того часу, поки почне відновлюватися нормальна мікрофлора тваринного. Крім того, пробіотики досить дороги.
Органічні кислоти активно використовуються у вигляді кислот або солей в птахівництві та свинарстві. До найбільш ефективних препаратів відноситься мурашина кислота і її солі.
вважаємо гроші
В кінцевому підсумку ветеринарна медицина, за винятком антропозоонозних інфекцій, керується принципом економічної доцільності. На першому місці стоїть собівартість продукції. Тому практичні лікарі прагнуть отримати максимум терапевтичної або профілактичної ефективності при мінімумі грошей.
Від ціни антибактеріального препарату безпосередньо не залежить собівартість продукції, оскільки необхідно враховувати ряд інших чинників: періодичність та тривалість лікування, трудовитрати на антибактеріальну терапію, можливість виникнення рецидивів, період очікування після застосування препарату, коли не можна використовувати продукцію від тваринного, можливість виникнення резистентних штамів мікроорганізмів, вплив на продуктивність і якість тваринницької продукції. Нерідко дорожчий препарат за рахунок більшої ефективності або за рахунок меншої курсової дози виявляється економічно більш вигідним, ніж дешевший.
література
Gautam Dantas, Morten OA Sommer, Rantimi D. Oluwasegun, George M. Church. Bacteria Subsisting on Antibiotics.- Science.-320.-2008.- р.100-103
Забєліна І.К. Вплив жорсткої води на біодоступність енрофлоксацину у бройлерів. Цит. по http://www.webpticeprom.ru/ru/articles-maintenance.html?pageID=1232783542 .
Warren MJ et.al. Vet Pharmacol. Therap.- 20 (Supl.1) .- 1997.- 181-218
