1 Хараева З.Ф. 1 Нагоєва М.Х. 1 Афашагова М.М. 1 Баразбіева С.М. 1
1 ФГБОУ ВО «Кабардино-Балкарський державний університет ім Х. М. Бербекова»
Хронічний тонзиліт, хронічне, що протікає із загостреннями, запалення піднебінних мигдалин (гланд) в результаті частих ангін. При захворюванні відзначається біль при ковтанні, першіння в горлі, неприємний запах з рота, збільшення і болючість підщелепних лімфовузлів. Будучи хронічним вогнищем інфекції в організмі, знижує імунітет і може викликати розвиток пієлонефриту, інфекційного ендокардиту, ревматизму, поліартриту, аднекситу, простатиту, безпліддя. Ризик розвитку хронічного тонзиліту збільшується при імунних порушеннях. Загальна і місцева опірність організму знижується після перенесених інфекційних захворювань. Серед збудників хронічного тонзиліту найбільш часто зустрічається грамположительная кокковая флора з вираженим персистентного потенціалом в поєднанні з антибіотикорезистентністю. Комплекс виявлених властивостей збудників хронічних тонзилітів визначає необхідність пошуку нових методів терапії із застосуванням препаратів не антибактеріального походження, що впливають на чинники протистояння бактерій вродженому і набутому імунітету.
лейкоцити
інфекційно алергічні захворювання
хронічний тонзиліт
1. Азаматова Е. К. Цитокіновий статус крові та піднебінних мигдаликів у дітей з хронічним тонзилітом / Е. К. Азаматова, З. Ф. Хараева, Г. С. Мальцева // Російська отоларингологія. - 2009. - № 4 (41). - С.3-7.
2. Бухарін О. В. Биомедицинские аспекти персистенції бактерій // ЖМЕІ. - 1994. -Додаток. - С.4-13.
3. Бухарін О. В., Усвяцов Б. Я., Хуснутдинова Л. М. Деякі особливості мікрофлори мигдаликів і межмікробного взаємодії (в нормі і при патології) // ЖМЕІ. - 2000. - № 4. - С.82-84.
4. Навашин С. М. Мікро- та макроорганізм - взаємодія в інфекційному процесі при антибактеріальної терапії / С. М. Навашин // Антибіотики і хіміотерапія. - 1998. - т.43, № 11. - С.3-5.
5. Нагоєва М. Х. Стан показників фибронектина у хворих бактеріальної ангіною // Клінічна лабораторна діагностика. - 2010. - № 9. - С. 64а-64b.
6. Нагоєва М. Х. оцінка стану прозапальних і протизапальних цитокінів у хворих бактеріальної ангіною // Вісник медичних технологій. - 2009. - Е16. - № 1. - С.85-88.
7. Хараева З. Ф., Азаматова Е. К. Фактори персистенції збудників хронічних тонзилітів // Проблеми і перспективи сучасної науки. - 2009. - Т. 2, вип. 1. - С.234-235.
8. Kanatani H., Martin SE Catalase and superoxide dismutase activities in virulent and nonvirulent Staphylococcus aureus isolates // J. Clin. Microbiol. - 1985. - Vol. 21. - P.607-610.
9. Misra HP, Fridovich I. The role of superoxide anion in the autoxidation of epinephrine and a simple assay for superoxide dismutase // J. Biol. Chem. - 1972. - V. 247. - P.3170.
10. Nielsen SL, Black F., Storgaard M., Obel N. Evaluation of a method for measurement of intracellular killing of Staphylococcus aureus in human neutrophil granulocytes // J. Biochem. - 1995. - Vol.118 (2). - P.271-277.
Серед мигдалин лімфаденоїдного глоткового кільця хронічне запалення піднебінних мигдалин зустрічається набагато частіше, ніж всі інші разом узятих, тому під терміном «хронічний тонзиліт» завжди мають на увазі хронічний запальний процес у піднебінних мигдалинах. За даними різних авторів, хронічний тонзиліт серед дорослого населення зустрічається в 4-10% випадків, а серед дитячого - близько 12-15%.
Під впливом несприятливих факторів зовнішнього і внутрішнього середовища знижується опірність організму, наростають вірулентність і патогенність мікрофлори в лакунах мигдалин, що веде до виникнення ангіни і хронічного запалення в мигдалинах. При хронічному тонзиліті в мигдалинах виявлено близько 30 поєднань різних мікробів, однак у глибоких відділах лакун зазвичай немає великої полиморфности флори; частіше тут виявляється монофлора - різні форми стрептокока (особливо гемолитического), стафілокока і ін. При хронічному тонзиліті в мигдалинах можуть зустрічатися асоціації непатогенних мікробів. У дитячому віці в віддалених мигдалинах нерідко знаходять аденовіруси, які можуть грати певну роль в етіології і патогенезі хронічного тонзиліту. Таким чином, хронічний тонзиліт слід відносити до власне інфекційним захворюванням, обумовленим, в більшості випадків, аутоінфекцією.
Найбільш часто хронічний тонзиліт починається після ангіни. При цьому гостре запалення в тканинах мигдалин який зазнає повного зворотного розвитку, запальний процес триває і переходить в хронічну форму. У рідкісних випадках хронічний тонзиліт починається без попередніх ангін. Виникненню і розвитку його часто сприяє постійне аутоінфіцірованія з хронічних вогнищ інфекції (каріозні зуби, хронічне запалення в області носа і навколоносових пазух і ін.), А також бактеріальна і тканинна місцева і загальна аутоаллергия.
Проблема лікування хронічного тонзиліту (ХТ) залишається актуальною в сучасній медицині, що визначається широкої поширеністю даного захворювання, а також ймовірністю розвитку серйозних ускладнень і хронічних захворювань серцево-судинної системи, нирок і суглобів, недостатньою ефективністю традиційної антибіотикотерапії. З огляду на останні дані про велику різноманітність видів збудників і тенденції все більш частого виявлення умовно-патогенних мікроорганізмів, стає актуальним визначення мікрофлори глотки і чутливості її до антибіотиків. У криптах мигдаликів хворих на хронічний тонзиліт переважають грампозитивнімікроорганізми. Захворюваність ХТ досягла 25% від загальної захворюваності в структурі ЛОР-хвороб. Негативні наслідки при неправильному виборі антибіотиків і термінів лікування проявляються у збереженні збудників у вогнищі запалення і прояві резистентної флори з подальшою хронізації процесу.
Одним з ключових ланок у патогенезі інфекційних та інфекційно-алергічних захворювань, до яких відноситься ХТ, є взаємодія мікроорганізмів з лейкоцитами (фагоцитоз). При цьому бактерії виділяють фактори, інгібуючі активацію комплементу, активність лізоциму, інтерферону, що позначається на їх здатності виживати в умовах макроорганізму і стійкості до фагоцитозу [2,3,4]. Тому поряд з оцінкою стану імунної системи важливе значення має характеристика стійкості збудника до механізмів фагоцитозу.
Мета даного дослідження: вивчити мікробну флору піднебінних мигдалин у хворих ХТ, а також вивчити особливості факторів персистенції основних збудників хронічного тонзиліту, оцінивши антілізоцімную (АЛК), антіінтерфероновую (АІА), антікомплементарние (АКА) активності виділених мікроорганізмів, як можливі шляхи протистояння кіслороднезавісімому механізму фагоцитозу , а також активність антиоксидантних бактеріальних ферментів - каталази, супероксид дисмутази, як факторів стійкості киснево механізму фагоцит оза.
Матеріали та методи. В роботі використані 94 штаму: 45 належали до Staphylococcus aureus, 23 - Streptococcus salivarius, 13 - Streptococcus pyogenes, 13 - Streptococcus pneumoniae. Виділення бактерій з досліджуваного матеріалу і їх ідентифікацію проводили загальноприйнятими методами бактеріологічного дослідження. Для роботи використовували суспензії бактерій в 0.9% розчині NaCl з оптичною щільністю А510 0,2, що відповідає концентрації 1,5х109кл \ мл. Антілізоцімная активність (АЛК) бактерій вивчалася за методом Бухаріна О. В. [3]. Для оцінки рівня АЛА були прийняті наступні критерії: низький рівень АЛК - 1-2мкг \ мл, середній - 3-5мкг \ мл, високий - понад 5 мкг \ мл. Антікомплементарние і антіінтерфероновая активність (АКА) бактерій вивчалася за методами Бухаріна О. В. [3]. Активність каталази штамів бактерій визначали йодометричним методом. Активність каталази бактерій оцінювали по калібрувальної кривої, отриманої з використанням комерційного препарату каталази ( «Sigma», USA). Для визначення супероксид дісмутазной активності штамів Staphylococcus aureus використовували метод, заснований на утворенні адренохрома при автоокисления адреналіну 7. Ефективність внутрішньоклітинного киллинга оцінювалася за методом Nielsen SL [8]. Антибіотикочутливість визначали стандартним способом за допомогою диско-дифузного методу. Результати досліджень оброблялися загальноприйнятими статистичними методами.
Результати та обговорення. Оцінці ролі мікробного фактора в розвитку гнійно-запальних захворювань завжди приділяється велика увага, так як від виду мікроорганізму, що викликає інфекційний процес, залежать особливості перебігу, ризик розвитку ускладнень і прогноз тяжкості захворювання 1,4,5.
Результати дослідження мікрофлори мигдаликів хворих з ХТ показали, що в 40% випадків висівається S.aureus, в 30% і 17% - змішана мікрофлора - S.pyogenes спільно з S.salivarius і S.aureus спільно з S. pyogenes, відповідно. Крім того, в складі змішаної флори зустрічаються C.albicans (6%). Обсемененность грибкової флорою є доказом дисбіозу і локального імунодефіцитного стану мигдаликів. Серед виділених штамів у хворих з ХТ множинної антибіотикорезистентністю володіли 56% (53 штаму) збудників, при порівняльному аналізі видовий антибіотикорезистентності найбільшу кількість полірезистентних штамів відносилося до S.aureus - 62% (28 штамів).
До специфічних факторів захисту мікроорганізму відноситься антілізоцімная активність - здатність бактерій специфічно інактивувати лізоцим господаря і забезпечити збереження збудника в макроорганизме. Підвищення антілізоцімной активності сприяє тому, що бактеріальна клітина набуває додаткові кошти дистанційної дії, спрямованого на інактивацію механізмів імунітету організму і, як наслідок, збільшення числа збудника в мікробіоценозе. Антілізоцімной активністю (АЛК) володіло 67% (53 бактеріальних культури) з 94 вивчених штамів. Найбільше число штамів з антілізоцімной активністю виявлено серед культур, що відносяться до Staphylococcus aureus - 83% (39 штаму). Менша кількість бактеріальних культур Streptococcus pyogenes - 64% (41 штам), виділених із зіву, також мали АЛА. У штамів Streptococcus pneumoniae і Streptococcus salivarius антілізоцімная активність не виявлена. Як випливає з представлених в табл. 1 даних, найбільш часто у всіх групах штамів зустрічаються культури із середніми показниками активності АЛК. Підвищення персистентного потенціалу мікрофлори може відбуватися і під дією метаболітів грибів роду Candida, які здатні посилювати антілізоцімную активність золотистих стафілококів. Також звертає на себе увагу той факт, що всі штами гемолітична активних стафілококів володіли високим та середнім АЛК. Також можлива зміна персистентних характеристик бактерій під впливом лікарських засобів або, наприклад, токсинів бактерій. З отриманих даних можна зробити висновок, що в умовах дисбактеріозу, обумовленого дією ендотоксинів, відбувається підвищення антілізоцімной активності St. aureus і збільшення числа в мигдалинах.
Таблиця 1
Рівень антілізоцімной активності штамів, виділених у хворих з ХТ
штам
Число штамів з АЛА
Число штамів з різним рівнем АЛК (мкг \ мл)
1-2
3-4
5-6
7 і> 7
Staphylococcus aureus
83%
(39 штаму)
-
15 (20%)
20 (26%)
13 (18%)
Streptococcus pyogenes
64%
(41 штам)
15 (17%)
29 (32%)
30 (34%)
-
До секретуються засадам, що забезпечує персистирование мікробної клітини, слід віднести і «антіінтерфероновий» ознака, що характеризує здатність бактерій инактивировать антибактеріальну складову людського лейкоцитарного інтерферону. Антіінтерфероновая активність (АІА) відноситься до факторів, спрямованим на інактивацію захисних механізмів господаря, що забезпечує стабільний антагоністичний ефект в біоценозі. З урахуванням даних про прямий кореляційної зв'язку антіінтерфероновой активності (АІА) з вірулентністю бактерій [4], нами було проведено дослідження штамів, виділених при ХТ у хворих, на предмет виявлення цього фактора персистенції. Антіінтерфероновой активністю (АІА) володіло 57% (45 бактеріальних культур) з 94 вивчених штамів. Найбільше число штамів з антіінтерфероновой активністю також виявлено серед культур, що відносяться до Staphylococcus aureus - 73% (33 штаму). Серед штамів, що належать до роду Streptococcus, АІА не визначена.
Крім інтерферону, бактеріальної деградації піддається і комплемент за рахунок антікомплементарной активності мікроорганізмів. Досліджуючи фактори персистенції збудників хронічного тонзиліту, спрямовані на деградацію механізмів резистентності організму, ми перш за все досліджували АКА, оскільки система комплементу є не тільки ключовим фактором неспецифічної резистентності, вона задіяна в різних гуморальних і клітинних реакціях макроорганізму, спрямованих на підтримку його гомеостазу. Антікомплементарние активність (АКА) виявлена у 34% вивчених штамів S.aureus (табл. 2). Як видно з наведених у таблиці даних, штами пиогенного стрептокока мають АКА в 30% випадків. Як і при дослідженні АЛА, при вивченні АКА, більшість штамів мали середніми показниками активності (25 од \ мл).
Таблиця 2
Частота виділення і рівень антікомплементарной активності штамів, виділених з мигдалин хворих з хронічним тонзилітом
штам
% Бактерій, що виживають після фагоцитозу
Число штамів з АКА
Число штамів з різним рівнем АКА, (од \ мл)
12,5
25
50
Staphylococcus aureus
15,5-17,5%
34,2%
(25 штамів)
20,0%
(5штаммов)
64,0%
(16 штамів)
16%
(4 штаму)
Streptococcus pyogenes
13,0-22,0%
30,5%
(4 штаму)
46,8%
(15 штамів)
53,2%
(17 штамів)
-
Відомо, що первинними бактерицидними факторами, які виділяються фагоцитами, є перекис водню і продукти її свободнорадикального розкладання, такі як гіпохлорит і гідроксильний радикали. Патогенні та умовно-патогенні бактерії пристосовуються виживати в середовищі з підвищеною концентрацією перекису водню шляхом індукції генів раннього відповіді на окисне пошкодження [6,9,10]. Білковими продуктами цих генів є, серед інших, фермент каталаза, який розкладає перекис водню до нейтральних продуктів: води і молекулярного кисню і фермент супероксид дисмутаза (СОД), що розкладає супероксид аніон радикал до молекулярного кисню. СОД є одним з головних ферментів антиоксидантного захисту. Існує три її типу, що містять марганець, залізо, мідь-цинк. У мікроорганізмів зустрічаються всі три типи СОД. Деякі бактерії містять більше однієї СОД, що відрізняються по локалізації та експресії. Fe-СОД і Mn-СОД знаходяться в цитоплазмі і захищають бактеріальну ДНК і протеїни від окислення. Cu-Zn-СОД, перебуваючи в періплазме, захищає мембранні і періплазматіческом структури від екзогенного впливу супероксидів.
Вивчення впливу окисного стресу на зростання і мутагенез деяких бактерій показало, що СОД важливіша, ніж каталаза, для запобігання киснево гноблення приросту і індукції мутації. СОД-дефіцитні мутанти Staphylococcus xylosis були більш чутливими до гіпербаричної оксигенизации і паракват. Це дозволило зробити висновок, що СОД грає важливу роль в захисті від оксидативного стресу. У деяких дослідженнях показано, що СОД, як каталаза, є індуктивним ферментом, кількість якого залежить від зовнішнього окисного стресу.
Каталазна активність була виявлена у всіх штамів, виділених при посівах з мигдалин хворих з хронічним тонзилітом. При кількісній оцінці каталазной активності бактерій виявлено, що найбільш висока активність ферменту спостерігалась у штамів стафілококів (4,0-5,1 од \ 20млн), штами стрептококів володіли достовірно нижчою каталазной активністю (2,2-2,5 од \ 20млн і 2,3-2,7 од \ 20млн, відповідно) (р <0,05).
Надалі оцінювали ефективність внутрішньоклітинного киллинга бактерій з різною каталазной активністю. Виявили, то існує кореляція між виживанням бактерій після фагоцитозу і їх здатністю розкладати перекис водню. Спектрофотометрична оцінка каталазной активності лейкоцитів і стафілококів окремо і при змішуванні (в співвідношенні 1: 100) показала, що вона практично не знижувалася у стафілококів в процесі фагоцитозу (дані не наводяться). При оцінці ефективності внутрішньоклітинного киллинга бактерій фагоцитами виявлено, що штами, активно продукують каталазу, в середньому в 40% випадків не знищуються в фагосомах, що призводить до персистенції інфекційного агента в організмі. Коефіцієнт кореляції між каталазной активністю штамів і здатністю їх до колоніеобразованію після фагоцитозу дорівнює 0,9.
При оцінці супероксид дісмутазной активності бактерій виявлено, що вивчені штами такої не мали (дані не наводяться).
Висновок. Таким чином, серед збудників ХТ у хворих найбільш часто зустрічається грамположительная кокковая флора з вираженим персистентного потенціалом в поєднанні з антибіотикорезистентністю. Комплекс виявлених властивостей збудників хронічних тонзилітів визначає необхідність пошуку нових методів терапії із застосуванням препаратів неантібактеріального походження, що впливають на чинники протистояння бактерій вродженому і набутому імунітету.
бібліографічна посилання
Хараева З.Ф., Нагоєва М.Х., Афашагова М.М., Баразбіева С.М. Персистентного ПОТЕНЦІАЛ ЗБУДНИКІВ хронічного тонзиліту // Сучасні проблеми науки та освіти. - 2016. - № 2 .;
URL: http://www.science-education.ru/ru/article/view?id=24358 (дата звернення: 11.06.2019).
Пропонуємо вашій увазі журнали, що видаються у видавництві «Академія природознавства»
(Високий імпакт-фактор РИНЦ, тематика журналів охоплює всі наукові напрямки)
Ru/ru/article/view?
