Бак посів: суть аналізу, як здавати, розшифровка, чутливість до антибіотиків

1. Для харчування і дихання потрібні умови
2. Мета культивування мікроорганізмів і значимість її для діагностики
3. Коли призначається бак посів і як розібратися у відповідях?
4. Як «знайти управу» на патогенний мікроорганізм?
5. Таблиця: альтернативний приклад результатів бак-посіву з виявленням ефективних антибіотиків
6. Правильна підготовка до бактеріологічному аналізу - запорука достовірного результату
7. Інші питання, що хвилюють пацієнтів
8. Відео: ролик-демонстрація по бак-посіву з цервикального каналу
9. методи посіву
10. Виділення штамів і вивчення чистих культур

Відомо, що мікроорганізми, незважаючи на свій «малий зріст», теж мають харчові «пристрасті», температурний оптимум, в загальному, середовище, яке їм ідеально підходить, де вони відчувають себе комфортно і добре, а тому починають інтенсивно розмножуватися і рости.

Бактеріологічний посів або, як прийнято називати коротше - бак посів, застосовується для отримання великої кількості мікробів одного виду (чиста культура) з метою вивчення їх фізико-хімічних і біологічних властивостей, щоб потім отримані дані використовувати для діагностики інфекційних захворювань.

На жаль, навіть популярні нині імуноферментний аналіз (ІФА) , полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) і інші методи, основним недоліком яких є хибнопозитивні або помилково негативні результати, не завжди можуть ідентифікувати збудника. Крім того, вони не здатні підібрати антибактеріальні препарати спрямованої дії. Таке завдання вирішує бак посів, який часто не поспішають призначати, посилаючись на те, що, наприклад, уреа- мікоплазми повільно культивується, а вартість аналізу чимала. Однак адже і здоров'я того варте!

Для харчування і дихання потрібні умови

Мікробіологи нині знають, що кожному збудника потрібна своя «рідна» середовище з урахуванням її рН, окисно-відновних потенціалів, в'язкості, вологості і осмотичних властивостей. Середовища можуть бути м'якими і твердими, простими і складними, універсальними і не дуже, проте у всіх випадках вони повинні забезпечувати харчування, дихання, розмноження і зростання бактеріальної клітини.

приклад зростання мікроорганізмів після бак-посіву в живильне середовище

Деякі середовища (тиогликолевая, Сабуро) підходять для широкого кола мікроорганізмів і називаються універсальними. Інші ж призначені тільки для певних видів, наприклад, пневмокок і золотистий стафілокок, які продукують гемолізини, ростуть на кров'яному агарі, який служить для виділення особливо «примхливих» і, разом з тим, небезпечних штамів. Таким чином, різновидів середовищ безліч, де кожна з них вирощує своє коло мікроорганізмів.

Мета культивування мікроорганізмів і значимість її для діагностики

Крім води, повітря, грунту, що містять в тих чи інших концентраціях різні мікроорганізми, в тому числі і приносять хвороба (патогенні), багато галузей медичної науки цікавлять мікроби, що живуть на шкірі і слизових людського організму, які можуть бути представлені:

• Постійними мешканцями, що не несуть ніякої небезпеки людині, тобто, нормальної мікрофлорою організму, без якої ми просто жити не можемо. Наприклад, зникнення бактерій, що живуть в кишечнику і беруть участь в процесі травлення, призводить до дисбактеріозу, лікувати який - справа непроста. Так само відбувається і з зникненням вагінальної мікрофлори. Її тут же заселяють умовно-патогенні мікроорганізми, гарднерели, наприклад, які викликають бактеріальний вагіноз (гарднерельоз) ;
• Умовно-патогенною флорою, яка приносить шкоду лише у великих кількостях при певних умовах (імунодефіцит). Вищезгадана гарднерела - представник такого типу мікроорганізмів;
• Наявністю патогенних мікробів, які в здоровому тілі не присутні. Вони чужі людському організму, куди потрапляють випадково при контакті з іншим (хворим) людиною і викликають розвиток інфекційного процесу, часом, досить важкого або навіть смертельного. Наприклад, зустріч зі збудниками сифілісу - ще куди не йшло, на перших порах лікується, а ось (боронь Боже!) Випустить на волю холеру, чуму, чорну віспу і ін.

На щастя, багато хто з них переможені і в даний час знаходяться «за сімома печатками» в спеціальних лабораторіях, проте людство в будь-який момент має бути готове до навали невидимого ворога, здатного знищити цілі народи. Бактеріологічний посів в подібних випадках грає, мабуть, головну роль в ідентифікації мікроорганізму, тобто, визначенні роду, виду, типу і т.д. (Токсономіческое положення), що дуже важливо для діагностики інфекційних процесів, в тому числі і захворювань, що передаються статевим шляхом.

Таким чином, методи посіву, як і поживні середовища, бувають різними, проте, мета у них одна: отримати чисту культуру без сторонніх домішок у вигляді мікробів інших класів, які мешкають повсюдно: у воді, в повітрі, на поверхнях, на людину і всередині його.

Коли призначається бак посів і як розібратися у відповідях?

Назва мікроорганізму і його кількість

Бактеріологічний аналіз пацієнти самі собі не призначають, це робить лікар, якщо у нього є підозри, що проблеми хворого, пред'являє різні скарги, пов'язані з проникненням в організм патогенного збудника або з посиленим розмноженням мікроорганізмів, які постійно живуть з людиною, але виявляють патогенні властивості тільки в певних умов. Здавши аналіз і через деякий час отримавши на руки відповідь, людина губиться, а часом і лякається, побачивши незрозумілі слова і позначення, тому, щоб цього не сталося, хочеться дати короткі роз'яснення з даного питання:

1. Першим пунктом ув'язнення, як правило, міститься назва збудника на латинській мові, наприклад, Escherichia coli. Це - кишкова паличка, вона є природним мешканцем кишечника і в допустимих кількостях ніякої шкоди не приносить;
2. Наступний пункт - концентрація мікроорганізму. Е. coli - рясний ріст (1х10 ^ 6 і більше) норма - менше 1 x 10 ^ 4;
3. Далі - патогенність: флора умовно-патогенна.

При дослідженні біологічного матеріалу на присутність патогенних мікроорганізмів відповідь може бути негативним або позитивним ( «поганий бак посів»), оскільки організм людини є для них лише тимчасовим притулком, а не природним місцем існування.

Інший раз, в залежності від того, який матеріал підлягає посіву, можна побачити кількість мікроорганізмів, виражене в колонієутворюючих одиницях на мл (одна жива клітина дасть зростання цілої колонії) - КУО / мл. Наприклад, посів сечі для бактеріологічного дослідження при нормі дає до 103 КУО / мл усіх виявлених бактеріальних клітин, в сумнівних випадках (аналіз повторити!) - 103 - 104 КУО / мл, при запальному процесі інфекційного походження - 105 і вище КУО / мл. Про двох останніх варіантах в розмовній мові, часом, виражаються просто: «Поганий бак посів».

Як «знайти управу» на патогенний мікроорганізм?

Одночасно з посівом матеріалу в таких ситуаціях проводиться посів мікрофлори на чутливість до антибіотиків, який дасть чітку відповідь лікаря - які антибактеріальні препарати і в яких дозах «злякають» «непроханого гостя». Тут теж є своя розшифровка, наприклад:

• Вид мікроорганізму, припустимо, та ж Е.coli в кількості 1х10 ^ 6;
• Назва антибіотика з позначенням (S) вказує на чутливість збудника до цього препарату;
• Вид антибіотиків, які не діють на мікроорганізм, позначається символом (R).

Бактеріологічний аналіз представляє особливу цінність у визначенні чутливості до антибіотиків, оскільки основною проблемою в боротьбі з хламидией, мікоплазмою, уреаплазмою і ін. Залишається підбір дієвого лікування, що не приносить шкоди організму і не вдаряє по кишені пацієнта.

Таблиця: альтернативний приклад результатів бак-посіву з виявленням ефективних антибіотиків

Правильна підготовка до бактеріологічному аналізу - запорука достовірного результату

Бактеріологічному аналізу може піддаватися будь-який біологічний матеріал, взятий у людини (шкіра, кров, сперма, слизові ротової порожнини, дихальних і сечостатевих шляхів, шлунково-кишкового тракту, органів зору, слуху та нюху і ін.). Найчастіше бак посів призначають гінекологи і урологи, тому на ньому слід кілька зупинитися.

Правильна підготовка до бактеріологічному посіву буде запорукою правильного результату, тому що в противному випадку, аналіз доведеться здавати заново і чекати призначений час. Як здати кров на стерильність з вени - це завдання медпрацівників. Від хворого тут, як правило, нічого не залежить, він просто надає ліктьовий згин, а медсестра проводить забір в стерильну пробірку з дотриманням всіх правил асептики і антисептики.

Інша справа - сеча або мазок з статевих шляхів. Тут пацієнт повинен забезпечити перший етап (паркан), дотримуючись запропоновані правила. Слід зауважити, що сеча жінок і чоловіків дещо відрізняється, хоча в сечовому міхурі у обох статей вона стерильна:

• У жінок при проходженні через сечовипускальний канал може захопити невелику кількість непатогенних коків, хоча в цілому, часто залишається стерильною;
• У чоловіків все трохи по-іншому. Передня частина уретри може забезпечити проходить сечу знаходяться там:
  1. діфтероіди;
  2. стафілококами;
  3. деякими непатогенними грамнегативними бактеріями, що і покаже згодом бактеріологічний аналіз.

Однак, якщо вони знаходяться в допустимої концентрації (до 103 КУО / мл), то лякатися нема чого, це варіант норми.

Щоб уникнути присутності інших мікроорганізмів і максимально забезпечити стерильність взятого матеріалу, перед здачею аналізу проводиться ретельний туалет статевих органів (вхід у піхву у жінок закривається ватним тампоном - захист від попадання виділень статевих органів). Для аналізу береться середня порція сечі (початок сечовипускання в унітаз, приблизно 10 мл середньої порції в стерильну баночку, закінчення в унітаз). Пацієнтам необхідно знати: сеча, взята на посів, повинна бути оброблена не пізніше, ніж через дві години при зберіганні не вище 20 ° С, тому слід розраховувати час на транспортування.

Крім цього матеріал на бак посів при необхідності беруть з уретри і прямої кишки у чоловіків, з уретри, прямої кишки, піхви, шийки матки і цервікального каналу - у жінок, але це відбувається в медичному закладі, куди пацієнт повинен прибути. Підмивання, спринцювання і використання антисептичних засобів в таких випадках заборонено.

Інші питання, що хвилюють пацієнтів

Багато пацієнтів цікавляться, скільки днів робиться аналіз. Однозначно на це питання відповісти не можна, все залежить від того, який матеріал піддається дослідженню і який збудник потрібно шукати. Іноді відповідь готовий через 3 дня, іноді через тиждень або навіть днів 10 - 14, оскільки деякі зразки вимагають пересіву на інше середовище.

Чи не обходять стороною люди, які летять на бак посів і питання про ціну аналізу. Орієнтовна вартість в Москві становить близько 800 - 1500 рублів. Зрозуміло, вона може бути вище і залежить від широти спектра бактеріологічного пошуку. Безкоштовно аналіз, напевно, можна здати при вагітності в жіночій консультації, або в поліклініці за особливими медичними показаннями.

Для вагітних бак посів є обов'язковим, здається 2 рази (при постановці на облік і в 36 тижнів), при цьому, мазок береться не тільки з статевих шляхів, а й зі слизових носа і горла. Об'єктом пошуку в даному випадку, окрім урогенітальних інфекцій, буде золотистий стафілокок (Staphylococcus aureus), який в післяпологовому періоді може накоїти чимало лиха (гнійний мастит та ін). Крім цього, вагітним в обов'язковому порядку робиться посів сечі, зіскрібка вагінального епітелію і мазки з шийки матки і цервікального каналу.

Багато жінок, перед тим як відправитися на процедуру дуже бояться таких страшних слів і починають роздумувати: «А чи потрібно це? Може, не піти ». Поспішаємо запевнити, що аналізи абсолютно безболісні. Мазок з шийки матки і цервікального каналу береться стерильною цітощеткой, не завдаючи жінці абсолютно ніякого болю, зате згодом бак посів з ш / м і ц / к захистить і майбутню матір, і плід від можливих ускладнень. Об'єктом пошуку при вагітності є збудники хламідіозу, уреа- і мікоплазми, дріжджоподібних грибок роду Candida (Зазвичай це Candida albicans), трихомонади і інші умовно-патогенні і патогенні мікроорганізми.

Відео: ролик-демонстрація по бак-посіву з цервикального каналу

Окремі випадки, особливо цікаві тим, хто здає аналізи

Потрапивши в статеві шляхи патогенні мікроорганізми, через найкоротший час освоюються і починають свою шкідливу діяльність. Наприклад, завжди патогенні гонококи (Neisseria), що є винуватцями досить неприємної хвороби, званої гонореєю та відповідних положень ЗПСШ, відчувають себе «як вдома» буквально на 3 день. Вони починають активно розмножуватися і сміливо рухатися по статевих шляхах вгору, захоплюючи все нові території. Всім відомо, що гонорея нині непогано лікується і її вже майже ніхто не боїться. Але для початку її потрібно знайти. Основним методом пошуку цієї інфекції вважається бак посів, культивування, ідентифікація за допомогою фарбування по Граму, мікроскопія.

Знайдені в мазку, взятому «на флору» з статевих шляхів, попарно лежать «кавові зерна» (диплококки), не вказують на наявність венеричного захворювання. Така мікрофлора піхви часто з'являється в постменопаузі і ні про що погане не говорить. Відібраний в нестерильних умовах на предметне скло і пофарбований метиленовим синім або за Романовським (цитологія) мазок, не може диференціювати мікроорганізм. Він може тільки припустити і направити пацієнтку на додаткове дослідження (отримання ізольованою культури).

Слід зауважити, що, якщо зішкріб зі слизових сечостатевих шляхів, взятий для посіву на уреаплазму, є не таким вже рідкісним явищем, то посіву сечі самі лікарі часто уникають, оскільки з нею працювати складніше.

Труднощі в діагностиці створює хламідійна інфекція , Що приносить велику шкоду не тільки при вагітності. Крім цього, хламідія викликає безліч захворювань, властивих не тільки жінкам, а й чоловічому населенню теж, тому її сіють, культивують, вивчають, визначають чутливість до антибактеріальної терапії та, таким чином, борються з нею.

При вагітності взагалі без бактеріологічного посіву важко обійтися, оскільки багато мікроорганізми, маскуючись в цитологічному мазку, можуть бути пропущені. Тим часом, вплив деяких збудників ЗПСШ на плід буває згубним. До того ж лікувати вагітну жінку значно складніше, а призначати антибіотики «на око» просто неприпустимо.

методи посіву

Для виділення чистих культур збудників на першому етапі вдаються до їх посіву на відповідні середовища, який проводиться в спеціальних (стерильних!) Умовах. В основному, перенесення матеріалу на середу здійснюється за допомогою пристроїв, що застосовуються ще в 19 століття великим Луї Пастером:

• Бактеріальної петлею;
• Пастерівської піпеткою;
• Скляною паличкою.

Звичайно, багато інструментів за 2 століття зазнали змін, на зміну прийшли пластикові стерильні і одноразові, однак і старі не залишилися в минулому, продовжуючи і понині служити мікробіологічної науці.

Перший етап отримання колоній вимагає дотримання певних правил:

1. Посів здійснюється над спиртівкою в боксі, попередньо обробленому дезинфектантами і кварцуванням, або в ламінарному шафі, що забезпечує стерильність в робочій зоні;
2. Одяг медпрацівника, рукавички і середовище також повинні бути стерильними, оскільки зворотне заважає виділенню ізольованих штамів;
3. Працювати в боксі потрібно швидко, але акуратно, не можна розмовляти і відволікатися, при цьому - необхідно пам'ятати про особисту безпеку, адже матеріал може бути заразним.

Виділення штамів і вивчення чистих культур

Виділення штамів не завжди однаково, оскільки деякі біологічні середовища, що знаходяться в людському організмі вимагають індивідуального підходу, наприклад, гемокультуру (кров) спочатку в рідкому середовищі (співвідношення 1: 10) трохи «підрощують», оскільки кров (нерозведена) може вбити мікроорганізми, а потім, через добу або більше, пересівають на чашки Петрі.

Посів сечі, промивних шлункових вод та інших рідких матеріалів теж має свої особливості, де для отримання чистої культури, рідина спочатку слід центрифугувати (умови - асептичні!), А вже потім сіяти, причому не саму рідину, а її осад.

Культивування і вирощування колоній здійснюють на чашках Петрі або поміщають спочатку в рідку середу, розлиту в стерильні флакончики, а потім ізольовані колонії ще раз висівають, але вже на скошений агар і поміщають матеріал на добу в термостат. Переконавшись в чистоті отриманої культури, штами переносять на предметне скло, роблять мазок і забарвлюють по Граму (найчастіше), Цілем-Нільсеном та ін. І для диференціювання вивчають морфологію мікроба під мікроскопом:

• Розмір и форму бактеріальної Клітини;
• Наявність капсул, джгутіків, суперечка;
• Тінкторіальні Властивості (відношення мікроорганізму до фарбування) *.

* Читач, мабуть, чув про таке Збудник, як Бліда трепонема? Це - збудник сифілісу, а її назва (бліда) тому і з'явилося, що вона погано сприймає фарби і залишається рожевуватим при фарбуванні за Романовським. Мікроорганізми, що не сприймається анілінові барвники називаються грамнегативними, а сприймають - грампозитивні. Грамнегативних бактерій надають рожевий або червоний колір при фарбуванні за Грамом додаткові барвники (фуксин, сафранін).

Бак посів можна назвати древнім аналізом, проте його популярність від цього аж ніяк не падає, хоча сучасна бактеріологія має можливості виділення не тільки штамів, а й окремої клітини з нього, яка називається клоном. Однак для отримання клону необхідний спеціальний прилад - мікроманіпулятор, який в звичайних лабораторіях відсутня, оскільки застосовується, в основному, в науково-дослідних цілях (генетичні дослідження).